液相色谱2-分配、离子交换、凝胶.ppt

第二节分配色谱一、基本原理2、分配色谱原理
（1）固定相为液体
将某种溶剂涂布在吸附剂颗粒表面或纸纤维上，形成一层液膜，称为固定相。
吸附剂颗粒表面或纸纤维叫载体或担体。
根据组分在两相中的溶解度不同而分离。
（2）“相似相溶”原则
极性物质在极性溶剂中溶解度大，K大；
非极性物质在非极性溶剂中溶解度大，K大。
（3）分配定律与分配等温线
（4）分配色谱的特点：
a、重现性
b、峰对称
c、无强烈滞留现象.
几乎适用于各种类型的化合物，特别适宜于亲水性物质，如极性较大的生物碱、苷类、有机酸、糖类及氨基酸的衍生物等。
二、载体三、固定相和流动相的选择反相分配色谱：固定相的极性小于流动相的极性。
固定液：硅油、液体石蜡等极性较小的有机溶剂。
流动相：水、各种水溶液（酸、碱、盐及缓冲液）、与水混合的有机溶剂。
洗脱顺序:极性小的组分保留作用强；极性大的组分保留作用弱

四、分配色谱操作注意事项第三节离子交换色谱法(ionexchangechromatography)（2）离子交换过程
水溶液中（流动相中）的各种离子，可与离子交换树脂上固定的离子基团结合，使原来与其结合的离子被置换，进入流动相而发生置换。2、分离机理
（1）不同的离子与交换树脂的结合力不同，从而固定相对它的保留能力不同，从而造成差速迁移。
（2）离子交换平衡：

二、离子交换树脂2、离子交换树脂的类型
（1）阳离子交换树脂—可交换的离子为阳离子。
氢型、钠型
强酸型、弱酸型、中强酸型（－COOH、－PO3H、－SH）
例如：磺酸型R-SO3－H+(pH范围宽)
**应注意pH范围，否则交换容量急剧下降。
（2）阴离子交换树脂—可交换的离子为阴离子。
按不同碱性分：
强碱型（季胺基团）—NR3+(pH<11)
－NH2,－NHR,－NR2等(pH<8)
按可交换的离子分：氢氧型、氯型3、离子交换树脂的特性
①交联度：表示交联剂在离子交换树脂中所占的百分含量，通常使用4～12%的树脂。
交联度大：树脂孔小，刚性强，孔穴多，离子基团多，溶胀小。
适合于体积较小的无机离子的分离
交联度小：树脂孔大，刚性差，渗透性好。
适合于体积较大的有机离子的分离
②溶胀：树脂内极性基团吸水性极强，大量的水进入树脂内部，产生膨胀，叫溶胀。
溶胀程度与树脂类型、交联度有关。
因此，严禁干法装柱。三、经验规则（亲和力大小规则）四、流动相2、对分离的影响
①流动相主要影响组分离子和交换基团形成离子对的过程
②pH对弱酸、弱碱的影响
影响其离解平衡，即控制了组分形成离子的程度：
[离子]组分↑，则K’↑；[离子]组分↓，则K’↓
不同离子交换剂的pH适用范围：
强酸型：较宽;强碱型：pH<11;
弱酸型:pH>6;弱碱型：pH<8③离子强度的影响(盐类浓度)
离子强度↑，溶剂强度↑，洗脱能力↑。
④平衡离子(即流动相中的盐类)的影响
它的种类可影响分离的选择性，浓度影响溶剂强度；它们与树脂的亲合力不同，从而影响组分的相对保留值：
a.离子浓度相同时，高电荷离子与交换基团亲合力大
b.同价离子，原子量增大亲和力增加
c.水合离子半径越小，亲和力越大。
3、流动相的选择（淋洗液）
①用去离子水溶解淋洗剂配制而成
淋洗剂为电解质（含阳离子、阴离子），其中对分离起实际作用的称淋洗离子：
如NaCO3水溶液为流动相，分离无机阴离子时，Na2CO3是淋洗剂，CO32－是淋洗离子。
②选择的基本原则：
理论上：淋洗离子与树脂的亲和力应接近或稍高于被测离子。
实际：样品组分中有强保留离子和弱离子时，若选择与保留最强的离子的亲和力接近的淋洗离子，弱保留的离子会很快流出色谱柱，不能达到分离。
所以根据样品组成，通过实验选择。五、应用第四节空间排阻色谱（凝胶色谱）一、基本原理
1、分离机理
（1）前三种是亲和力不同而分离；
（2）凝胶色谱中组分与固定相之间无作用力，只是根据分子量大小来分离；
（3）凝胶—有一定的孔径分布范围的多孔物质。组分进入柱内后，全向固定相的孔中扩散，保留程度取决于孔和组分分子的大小。
小分子:将全部渗入细孔中,在流经柱时,经历的路程最长.
中等大小分子:渗入部分较大的孔隙,而被较小的孔隙排斥,经历的路程居中.
大分子:完全被排斥在空隙外,经历的路程最短.SizeExclusionChromatography2、分配系数和保留值
(1)分配系数K
组分进入柱子，从高浓度的流动相中向固定相孔隙内扩散，扩散平衡时
（2）保留值
保留方程VR=Vm+KVS
在凝胶色谱中Vm：外水体积（V0）
VS：内水体积（Vi）
当K=1时，VR＝Vm＋VS＝V0＋Vi
K=0时，VR＝Vm＝V0
所以，所有组分均在（Vi+V0）体积内流出。
三、实验条件的选择2、凝胶的溶胀
干凝胶+10倍吸水量的洗脱剂中，缓慢搅拌；