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第二节分配色谱一、基本原理2、分配色谱原理 (1)固定相为液体 将某种溶剂涂布在吸附剂颗粒表面或纸纤维上,形成一层液膜,称为固定相。 吸附剂颗粒表面或纸纤维叫载体或担体。 根据组分在两相中的溶解度不同而分离。 (2)“相似相溶”原则 极性物质在极性溶剂中溶解度大,K大; 非极性物质在非极性溶剂中溶解度大,K大。 (3)分配定律与分配等温线 (4)分配色谱的特点: a、重现性 b、峰对称 c、无强烈滞留现象. 几乎适用于各种类型的化合物,特别适宜于亲水性物质,如极性较大的生物碱、苷类、有机酸、糖类及氨基酸的衍生物等。 二、载体三、固定相和流动相的选择反相分配色谱:固定相的极性小于流动相的极性。 固定液:硅油、液体石蜡等极性较小的有机溶剂。 流动相:水、各种水溶液(酸、碱、盐及缓冲液)、与水混合的有机溶剂。 洗脱顺序:极性小的组分保留作用强;极性大的组分保留作用弱 四、分配色谱操作注意事项第三节离子交换色谱法(ionexchangechromatography)(2)离子交换过程 水溶液中(流动相中)的各种离子,可与离子交换树脂上固定的离子基团结合,使原来与其结合的离子被置换,进入流动相而发生置换。2、分离机理 (1)不同的离子与交换树脂的结合力不同,从而固定相对它的保留能力不同,从而造成差速迁移。 (2)离子交换平衡: 二、离子交换树脂2、离子交换树脂的类型 (1)阳离子交换树脂—可交换的离子为阳离子。 氢型、钠型 强酸型、弱酸型、中强酸型(-COOH、-PO3H、-SH) 例如:磺酸型R-SO3-H+(pH范围宽) **应注意pH范围,否则交换容量急剧下降。 (2)阴离子交换树脂—可交换的离子为阴离子。 按不同碱性分: 强碱型(季胺基团)—NR3+(pH<11) -NH2,-NHR,-NR2等(pH<8) 按可交换的离子分:氢氧型、氯型3、离子交换树脂的特性 ①交联度:表示交联剂在离子交换树脂中所占的百分含量,通常使用4~12%的树脂。 交联度大:树脂孔小,刚性强,孔穴多,离子基团多,溶胀小。 适合于体积较小的无机离子的分离 交联度小:树脂孔大,刚性差,渗透性好。 适合于体积较大的有机离子的分离 ②溶胀:树脂内极性基团吸水性极强,大量的水进入树脂内部,产生膨胀,叫溶胀。 溶胀程度与树脂类型、交联度有关。 因此,严禁干法装柱。三、经验规则(亲和力大小规则)四、流动相2、对分离的影响 ①流动相主要影响组分离子和交换基团形成离子对的过程 ②pH对弱酸、弱碱的影响 影响其离解平衡,即控制了组分形成离子的程度: [离子]组分↑,则K’↑;[离子]组分↓,则K’↓ 不同离子交换剂的pH适用范围: 强酸型:较宽;强碱型:pH<11; 弱酸型:pH>6;弱碱型:pH<8③离子强度的影响(盐类浓度) 离子强度↑,溶剂强度↑,洗脱能力↑。 ④平衡离子(即流动相中的盐类)的影响 它的种类可影响分离的选择性,浓度影响溶剂强度;它们与树脂的亲合力不同,从而影响组分的相对保留值: a.离子浓度相同时,高电荷离子与交换基团亲合力大 b.同价离子,原子量增大亲和力增加 c.水合离子半径越小,亲和力越大。 3、流动相的选择(淋洗液) ①用去离子水溶解淋洗剂配制而成 淋洗剂为电解质(含阳离子、阴离子),其中对分离起实际作用的称淋洗离子: 如NaCO3水溶液为流动相,分离无机阴离子时,Na2CO3是淋洗剂,CO32-是淋洗离子。 ②选择的基本原则: 理论上:淋洗离子与树脂的亲和力应接近或稍高于被测离子。 实际:样品组分中有强保留离子和弱离子时,若选择与保留最强的离子的亲和力接近的淋洗离子,弱保留的离子会很快流出色谱柱,不能达到分离。 所以根据样品组成,通过实验选择。五、应用第四节空间排阻色谱(凝胶色谱)一、基本原理 1、分离机理 (1)前三种是亲和力不同而分离; (2)凝胶色谱中组分与固定相之间无作用力,只是根据分子量大小来分离; (3)凝胶—有一定的孔径分布范围的多孔物质。组分进入柱内后,全向固定相的孔中扩散,保留程度取决于孔和组分分子的大小。 小分子:将全部渗入细孔中,在流经柱时,经历的路程最长. 中等大小分子:渗入部分较大的孔隙,而被较小的孔隙排斥,经历的路程居中. 大分子:完全被排斥在空隙外,经历的路程最短.SizeExclusionChromatography2、分配系数和保留值 (1)分配系数K 组分进入柱子,从高浓度的流动相中向固定相孔隙内扩散,扩散平衡时 (2)保留值 保留方程VR=Vm+KVS 在凝胶色谱中Vm:外水体积(V0) VS:内水体积(Vi) 当K=1时,VR=Vm+VS=V0+Vi K=0时,VR=Vm=V0 所以,所有组分均在(Vi+V0)体积内流出。 三、实验条件的选择2、凝胶的溶胀 干凝胶+10倍吸水量的洗脱剂中,缓慢搅拌;

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