糖的组织化学名师优质课赛课一等奖市公开课获奖课件.pptx

组织化学histochemistry特殊染色,经过应用一些能与组织细胞化学成份特异性结合显色试剂,定位地显示病变组织细胞特殊化学成份,同时又能保留原有形态改变,到达形态与代谢结合.可用于检测细胞内酶类、糖类、脂类、核酸、一些金属元素等。糖组织化学糖分类糖原一.糖原概念二.固定剂选取2.Gendre（冷4℃）
苦味酸无水乙醇饱和液80ml
甲醛15ml
冰醋酸5ml
临用前混合配制3.Lillie固定液（AAF）
无水乙醇85ml
冰醋酸5ml
甲醛10ml
固定液预冷4℃，固定24h后，95%乙醇脱水，包埋三.固定中注意事项四.显示糖原方法过碘酸-Schiff反应(一）染色原理Schiff氏试剂是付品红（碱性品红）经SO2作用后，形成无色溶液当Schiff氏试剂与醛基作用后，形成含有发色基团化合物，展现紫红色沉淀*PAS反应基本原理

1.经过过碘酸氧化作用，将糖分子中碳键打断，游离出醛基
2.醛基与Schiff试剂反应显出红色沉淀(二)染色步骤切片经二甲苯和各级酒精复水后，入0.5%过碘酸溶液中作用15分钟，取出后水洗。切片充分洗净后入Schiff‘s试剂中进行显色。作用15分钟左右，将切片取出水洗，为洗去非特异性着色，将切处理品入三级新配制亚硫酸中进行冲洗，取出后水洗，镜检。肝糖原-PAS染色X200肝糖原-PAS+苏木素复染X200【结果】
胞浆内PAS阳性物质呈紫红色，颗粒状或均质团块状，胞核呈蓝色或绿色
红色深浅反应含糖原量多少
【对照】
采取淀粉酶或唾液酶消化切片
对照片PAS（-），未处理片（+）PAS反应阳性物质ThisnormalglomerulusisstainedwithPAStohighlightbasementmembranes.Thecapillaryloopsoftheglomerulusarewell-definedandthin.A888kidney11-PASA888kidney14-PAS（三）PAS反应应用肝细胞水变性肝脂肪变性(石蜡切片)肝脂肪变性(冰冻切片)糖原累积症PAS（+）PAS（-）
肝细胞癌胆管癌
横纹肌瘤颗粒细胞肌母细胞瘤
Ewing肉瘤骨网织细胞肉瘤（四）注意事项5.Schiff试剂配法很多，区分不大，能够随意选取
6.Schiff试剂作用时，染色缸必须加盖，不然Schiff试剂将因SO2消失而失效Schiff试剂粘液物质(粘多糖)人体各种腺体及其它许多组织、细胞，如结缔组织、纤维母细胞、软骨基质等都能合成和分泌粘液物质，统称为粘多糖或粘液分类粘液物质染色在诊疗中应用胃粘膜上皮分泌中性粘液，而胃肠上皮化生或肠型胃癌细胞分泌酸性粘液
--AB-PAS染色区分中性与酸性粘多糖

酸性粘多糖含有硫酸基团和羧基。用阳离子染料与酸性基团结合形成盐键而显色。利用染液不一样PH值及不一样电解质浓度，能够区分酸性粘多糖二种基团
--HID-AB法不一样PH竞争性抑制
PH2.5时，二种酸性粘多糖均被奥蓝着色
PH1.0时，仅硫酸粘多糖着色
2.电解质浓度与粘液物质着色关系显示糖分子和酸性基团组化方法1.奥蓝-过碘酸Schiff氏法（AB-PAS）【染色原理】【染色步骤】Alcinblue染色液：
奥蓝1g，蒸馏水97ml，冰醋酸3ml
临用前过滤使用，调整PH2.5-3之间

【结果】
中性粘多糖（胃粘液）呈红色，酸性粘多糖（肠粘液）呈蓝色，酸性和中性混合粘液呈紫红色AB-PASX100AB-PASX2002.高铁双胺-奥蓝法（HID-AB）法肠型胃癌唾液酸粘液硫酸粘液弥漫型胃癌中性粘液高分化腺癌硫酸粘液中低分化腺癌唾液酸粘液大肠型化生硫酸粘液小肠型化生不含硫酸粘液高铁双胺染液【染色原理】【染色步骤】【结果】
硫酸粘液呈棕黑色，含羧基唾液酸粘液呈蓝色，中性粘液不着色胃-Spicer高铁双胺法X200