遗传学基因治疗培训课件.ppt

遗传学基因治疗本章内容提示基因治疗（Genetherapy）一、基因治疗策略

策略：直接基因治疗和间接基因治疗

1、直接基因治疗：纠正突变基因
在原位修复缺陷的基因，以达到治疗目的。为较理想的基因治疗策略，由于存在某些问题，目前正在努力之中。（未实现）2、间接疗法：
以正常的基因替代致病基因。
导入外源正常基因，代替有缺陷的基因。而对靶细胞而言，没有去除或修复有缺陷的基因。
用DNA重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的目的。途径:1、生殖细胞基因治疗但还存在某些问题：2．体细胞基因治疗somaticcellgenetherapy措施：存在的问题二、基因治疗的方法基因治疗首先获得目的基因通常从基因组中分离

基因克隆
↓
定位
↓
表达
↓
评价表达情况二）外源基因的转移1）物理方法（2）显微注射法（microinjection）例：转基因动物的制备（3）微粒子轰击法2）化学法磷酸钙+DNA→混合微细颗粒
↓
沉淀反应20~30min
↓
细胞在沉淀物中暴露5~24h

方法简单，但转化效率低。3）脂质体法（liposome）4）同源重组法通过同源重组定点插入珠蛋白基因5）病毒介导基因内转移（Viralmediatedtransfer）逆转录病毒(RNA)
常用的病毒载体
DNA病毒
1)逆转录病毒（retrovirus）
目前应用最多、最成功.病毒感染细胞后，其基因组RNA经逆转录产生双链DNA拷贝，插入宿主染色体形成前病毒（provirus），前病毒转录产生的正链既是病毒RNA，再与前病毒编码的外壳蛋白包装成新的病毒颗粒。例如：小鼠白血病病毒（Mo-MLV）基因组结构：逆转录病毒载体优点：缺点③逆转录病毒有致癌作用，可能使受体细胞癌变。
根据逆转录病毒的缺点，人们有目的地将其改造，保留其优点，除去癌基因和病毒基因，保留LTR和ψ包装信号。
6）受体载体转移法三）靶细胞的选择常见的靶细胞三、Gene治疗的现状与前景具备下列条件基因治疗实例2、乙型血友病逆转录病毒载体+FⅨcDNA

重组体

5`LTRFⅨneoSVPSOLTR3`

①导入仓鼠细胞（CHO）→FⅨ表达；
②导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→FⅨ表达；
③91年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→回植病人皮下→FⅨ基因表达，FⅨ基表达水平达正常人的5%。
是我国基因治疗成功的例子。3、黑色素瘤的基因治疗例：细胞因子基因治疗和肿瘤坏死因子基因治疗4、自杀基因的基因治疗如：
自杀基因+病毒载体
转染
重组载体例如：
单纯疱疹病毒哺乳动物细胞
HSVGene-TK
（在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达）Gene—TK

GCV（胸苷类似物）
TdR
Pp
GCV---p
抑制DNA合成脱氧胸苷酸

肿瘤细胞死亡

邻近细胞死亡/凋亡（旁观者效应）5、反义核酸基因治疗反义基因治疗四、基因治疗存在的问题与论理学一）导入基因的持续性和高效表达二）Gene治疗与社会伦理道德祝大家复习好