转化率的计算.pptx

会计学一、重组DNA导入大肠杆菌的方法（一）转化（transformation）一、重组DNA导入大肠杆菌的方法一、重组DNA导入大肠杆菌的方法一、重组DNA导入大肠杆菌的方法一、重组DNA导入大肠杆菌的方法一、重组DNA导入大肠杆菌的方法一、重组DNA导入大肠杆菌的方法/一、重组DNA导入大肠杆菌的方法（二）转导体外包装过程二、重组DNA导入真核细胞1.利用原生质体进行转化酵母4.电击转化二、重组DNA导入真核细胞（二）导入植物细胞（二）导入植物细胞（二）导入植物细胞（二）导入植物细胞在饲养平皿的滤纸上培养2天又称生物弹击法、微弹轰击法，借助高速金属微粒将DNA分子引入活细胞的转化技术。基因枪/具体操作植物细胞二、重组DNA导入真核细胞原理：/操作简便，成本低廉、可大批量转染、对细胞毒性小、效果稳定，但转染效率低。2.脂质体介导法/脂质体（lipofectin）载体法应用玻璃显微注射器，直接把外源DNA注射到宿主细胞核里，使其整合到染色体上。显微注射法(microinjection)二乙氨乙基（DEAE）葡聚糖为多聚阳离子试剂，能促进哺乳动物细胞摄入外源DNA。DEAE-dextran导入外源DNA的几种方法三、转化率及影响因素三、转化率及影响因素三、转化率及影响因素三、转化率及影响因素1）载体DNA类型、大小；重组DNA浓度、纯度
2）受体细胞
3）转化方法：同一转化方法技术参数影响转化率影响转化率的因素
（2）感受态细胞（competentcells)
①生长状态制备
感受态菌必须使用对数生长期的菌。
②必须在冰冷的条件下制备。
③CaCl2处理
要充分，使细菌细胞膜失去一些蛋白。
④储存感受态菌要在-70℃以下
⑤使用感受态菌时必须迅速融化
融化后一般不能再次冻存使用。