DGLC-33柱后碘衍生法测定芝麻中的黄曲霉毒素.pdf

应用文集

DGLC-33柱后碘衍生法测定芝麻中的黄曲霉毒素

关键词：柱后碘衍生法；芝麻；黄曲霉毒素

DGLC-33Determinationofaflatoxininsesamewithiodinederivation
aftercolumn

Keywords：iodinederivationaftercolumn,sesame,aflatoxin

引言
黄曲霉毒素(AFT)是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，具有极强的毒性和致癌性，可引发动物的肝癌、肾
癌、胃癌等，其中B1的毒性最强。我国规定在玉米、花生、花生油、坚果和干果等食品中的最高允许含量
为20µg/kg。1995年，世界卫生组织规定食品中黄曲霉毒素最高允许浓度为15µg/kg。免疫亲和柱是将特异
性的黄曲霉毒素单克隆抗体与载体蛋白偶联并填柱而成，能特效性地、高选择性地吸附黄曲霉毒素，而让其
它杂质通过柱子，使样品得以纯化，黄曲霉毒素吸附后可被极性有机溶剂洗脱。
本方法采用双三元液相色谱系统，使用DGP3600右泵分析，使用DGP3600左泵衍生，从而实现了对
黄曲霉毒素的柱后衍生测定。

测试条件
仪器：UltimateDGP3600RS系列，包括带有在线脱气单元的双三元梯度泵；带有一个六通阀的柱温箱；
FLD-3400RS检测器。

色谱柱：ThermoSyncronisC18,5µm4.6×150mm
衍生管：ReactionCoil750µL(PN:42631)+ReactionCoil375µL(PN:43700)
左泵（衍生泵）：0.05%碘溶液
右泵（分析泵）：22%乙腈+22%甲醇+56%水
左泵：0.2ml/min；分析泵：0.8ml/min
FLD检测器条件：激发波长365nm发射波长435nm
衍生化温度：70℃
进样量：100µL

样品前处理方法
准确称取经过磨细的样品10.0g，于250mL的具塞锥形瓶中，加入2.0g氯化钠及甲醇/水（70/30）至
50mL，震摇提取（约5min），定量滤纸过滤。准确移取10.0mL滤液，加入40mL水稀释，用玻璃纤维滤纸
过滤2次，保证滤液澄清。
准确移取25mL上述样品提取液上到免疫亲和柱（美国VICAM）上，流速控制在1滴/s。上样完成后，
注入20mL水清洗，并将空气通过免疫亲和柱，去除水分。
取4mL甲醇洗脱免疫亲和柱，流速为1滴/s。收集全部洗脱液于刻度管中，氮气吹至<0.5mL，用50%
甲醇/水定容至1mL，待测。

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结果和讨论
黄曲霉毒素标准品测定谱图
各物质浓度：
黄曲霉毒素M1：2.5ppb
黄曲霉毒素G1、G2、B1、B2：0.75ppb

图1黄曲霉毒素标准品测定谱图

样品及加标谱图（黑色为加标谱图）

图2样品及其加标测定谱图

标准工作曲线

表1各标准品线性

时间Cal.TypePoints相关系数C0C1线性范围LOD
min(Offset)(Slope)（µg/L）(S/N=3)
(µg/kg)
黄曲霉毒素M17.589LinOff50.99946.43975005.30580.5-150.1
黄曲霉毒素G28.709LinOff50.99971345.690118171.89370.15-4.50.03
黄曲霉毒素G110.213LinOff50.99971290.998913835.00400.15-4.50.04
黄曲霉毒素B211.418LinOff50.999968.772546151.07300.15-4.50.018
黄曲霉毒素B113.626LinOff50.999995.762936853.76960.15-4.50.03

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应用文集

样品检测及加标回收结果

表2样品含量及加标回收结果
检测值加标量µg/L加标后浓度µg/L加标回收%
黄曲霉毒素M1NA5.04.5691.2
黄曲霉毒素G2NA1.51.2583.0
黄曲霉毒素G1NA1.51.4798.0
黄曲霉毒素B2NA1.51.4596.4
黄曲霉毒素B1NA1.51.4697.4

结论
本方法采用GB/T18979-2003规定的高效液相色谱-柱后碘衍生法对芝麻中的黄曲霉毒素M1、G1、G2、B1
和B2进行了检测。由双三元液相色谱系统实现柱后衍生，即左泵为衍生泵，右泵为分析泵，柱温箱可提供高达
70℃的反应温度，该系统对5种黄曲霉毒素的检测灵敏高，检出限分别为M10.1µg/kg、G10.04µg/kg、G20.03
µg/kg、B10.03µg/kg和B20.018µg/kg，完全满足国标检测要求（G1、G2、B1和B2总检测限1µg/kg）。

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