产毒副溶血性弧菌快速检验方法（征求意见稿）.doc

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中华人民共和国FORMTEXT
出入境检验检疫行业标准
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XXXX
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产毒副溶血性弧菌快速检验方法
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TherapiddetectionoftoxicityVibrioParahaemolyticus
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本稿完成日期：2013-04-18
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XX发布
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XX实施
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中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局   发布
SN/TXXXXX—XXXX
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前言
本标准的附录A为规范性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局，中华人民共和国上海出入境检验检疫局，上海市临床检验中心，昆明市西山区疾病预防控制中心。
本标准主要起草人：陈丽萍，刘忠民，张继伦，陈芸，彭云霞，王庆忠，王珏。
本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

产毒副溶血性弧菌快速检验方法
范围
本标准第一法规定了产毒副溶血性弧菌三重PCR快速检测方法和结果判定；第二法规定了产毒副溶血性弧菌双重荧光PCR快速检测方法和结果判定。
本标准第一法适用于具备全自动毛细管电泳分析系统和普通PCR仪或者无荧光PCR仪但具备普通PCR仪和凝胶成像分析系统的实验室对携带致病因子（tdh和trh）产毒副溶血性弧菌进行快速检验；第二法适用于有荧光PCR仪或者选择使用荧光PCR仪的实验室对携带致病因子（tdh）产毒副溶血性弧菌进行快速检验。

规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T4789.7食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验
WS/T81副溶血性弧菌食物中毒诊断标准及处理原则
SN/T0173出口食品中副溶血性弧菌检验方法
SN/T2142国境口岸副溶血性弧菌感染监测规程
SN/T1193基因分析检测实验室技术要求
GB15981消毒与灭菌效果的评价方法与标准
GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法（GB/T6682-1992.neqISO3696:1987）
GB19489实验室生物安全通用要求
SN/T2102食源性病原体PCR检测技术规范
SN/T2424-2010进出口食品中副溶血性弧菌快速及鉴定检测方法实时荧光PCR方法

术语和定义
产毒副溶血性弧菌toxicityvibrioparahaemolyticus
含有致病因子（例如tdh和trh等）的副溶血性弧菌。若人食用携带产毒副溶血性弧菌食品后，极可能出现腹痛、腹泻(大多为水样便，重症者为粘液便或粘血便)、恶心、呕吐、发烧等中毒症状。
高风险食品highdangerousfoods
国境口岸生产经营、进出境的海产品(如鱼、虾、蟹、贝类)和腌醉制生食动物性食品。
水体waterbodies
国际海港水域水体、国际运输交通工具上压舱水、水产品养殖及暂养用水。
DNA
deoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸
多重PCR
是在同一个反应体系中加入一对以上的引物，同时检测几个目标基因的PCR方法。
TaqMan实时荧光PCRpolymerasechainreaction
使用荧光素标记的实时荧光聚合酶链反应。
tdh
副溶血性弧菌耐热溶血毒素所对应的基因。
trh
副溶血性弧菌耐热直接溶血毒素相关溶血毒素所对应的基因。
tlh
副溶血性弧菌不耐热溶血毒素所对应的基因。
gyrase
旋转酶对对应的基因。本标准扩增的相应片段为副溶血性弧菌的保守片段。
Ct值
每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。
检测对象
国境口岸和出入境腹泻人员粪便、呕吐物或肛拭，高风险食品，及需要检测的其他样品。

第一法产毒副溶血性弧菌三重PCR快速检测方法
方法原理
副溶血性弧菌中有一部分携带致病因子是产毒副溶血性弧菌。根据FDA2004标准推荐的扩增副溶血性弧菌tdh和trh