超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱分析氯霉素残留量检测方法.pdf

超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱分析氯霉素残留量检测方法

薄涛，李建中

氯霉素（Chloramphenicol）是一种广谱抗菌素，过去常用于人及动物各种传染病的治疗，对于
多种病原菌有较强的抑制作用。但是，氯霉素存在着严重的副作用，能引起人类再生障碍性贫血、
粒状白细胞缺乏症、新生儿灰色综合症等疾病。因此，动物源食品中氯霉素的残留对人类的健康构
成了巨大的潜在威胁。世界许多国家都禁止在食用性动物中使用氯霉素。欧盟、美国等国家均在法
规中规定氯霉素残留限量标准为“零允许量”（Zerotolerance），即不得检出。我国在2000年新版的
兽药药典中以将氯霉素删除，禁止其在食用性动物中的食用。目前，欧盟规定氯霉素最低要求执行
限量（MRPL）为：0.3µg/kg，即检测方法的检测低限必须不高于0.3µg/kg。
三重串联四极杆质谱是复杂基质中痕量组分定量分析的重要手段，通过多重反应监控模式
（MRM）能够提供高选择性和高灵敏度的检测。建立在亚二微米粒径填料基础上的超高效快速液相
色谱（RRLC）已得到广泛的应用，和QQQ联用能够提供高通量和高灵敏度的分离分析。本文运用
UHPLC-QQQ对动物源性食品中的氯霉素进行定量分析，通过对重复性、线形关系等方法学参数进
行考察，所建立的方法能在2.0分钟内对氯霉素完成快速、高灵敏度的检测分析。本方法采用Agilent
6460QQQ系统，利用JetStream鞘流气技术大大提高了去溶剂效果，同时减少了喷雾造成的离子扩
散损失，显著的提高了离子化效率，从而大大提高了灵敏度。本方法完全满足了国内外对氯霉素药
物日益严格的残留限量监测要求。

1实验部分

1.1仪器与试剂
美国安捷伦公司6460QQQ质谱仪；美国安捷伦公司1260UHPLC。

1.2液相和质谱条件

液相色谱柱为安捷伦ZobaxEclipseplusC18（2.1x50mm,1.8um）；流动相A为水，B为乙腈，
梯度（B%/min）：30/0，70/1.0，70/2.0；柱温30oC；进样量20µL，流速为0.3mL/min。
QQQ质谱参数（ESI-模式）：干燥气温度（GasTemp）350oC，干燥气流量（GasFlow）4mL/min，
雾化器压力（Nebulizer）40psi，鞘流气温度（SheathGasTemp）400oC，鞘流气流量（SheathGasFlow）
12mL/min，毛细管电压（Capillary）3500V，喷嘴电压（Nozzle）1800V，MRM条件：321>152(定
量，CE10eV)；321>257(定性，CE10eV)，安捷伦MassHunter软件用于定性（Qualitative）和定量
（Quantitative）分析。

2结果与讨论
图1为氯霉素的MRM和子离子谱图。本文对MS和LC条件进行优化，对线形关系（R2）、检
测限（LOQ）、峰面积重复性（RSD<3.0%,n=6）等方法学进行了考察。所建立的RRLC-QQQ能够
对氯霉素进行高灵敏度和高通量的定量分析。

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图1.1ng/mL氯霉素的MRM和子离子谱图

图2.2pg/mL氯霉素信噪比图

图3.20pg/mL连续6针进样氯霉素叠加谱图
20ppt:RSD=2.38%(n=6)

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图4.氯霉素标准曲线图
（2ppt,5ppt,20ppt,100ppt,500ppt,1ppb,10ppb,and50ppb）

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