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四种常见呼吸道病毒靶序列富集多重PCR--液相芯片检测方法的建立及初步应用的任务书
任务书
一、研究背景
呼吸道感染是全球范围内常见且经常引起死亡的疾病。近年来，随着新冠疫情的爆发，呼吸道感染对世界公共卫生产生了深远的影响。在临床实践中，医生面对呼吸道感染时常常需要准确快速地确定感染病原体，以选择合适的治疗方案。当前常见呼吸道病毒包括流感病毒、冠状病毒、腺病毒和副流感病毒等，这些病毒的富集和检测对于诊断和治疗呼吸道感染具有重大意义。
二、研究目的
本研究旨在建立一种基于多重PCR--液相芯片检测的呼吸道病毒靶序列富集方法，并初步在临床实践中应用。
三、研究内容和方法
1.设计呼吸道病毒靶序列富集多重PCR方案。根据已有文献和数据库，选择常见呼吸道病毒的特异性靶序列作为PCR引物，构建多重PCR反应体系进行富集。
2.开发基于液相芯片检测的呼吸道病毒检测技术。使用基于磁珠的DNA提取方法从样本中提取核酸，利用PCR产生的靶序列进行标记，并将标记的靶序列在液相芯片上进行检测和分析。
3.对富集及液相芯片检测技术进行验证。首先对富集的灵敏度、特异性和重现性进行验证，然后对液相芯片检测技术进行验证，并与传统的PCR检测方法进行比对。
4.在临床实践中初步应用。收集临床患者呼吸道标本，对样本进行富集和液相芯片检测，探讨该方法在临床实践中的应用价值及优势。
四、预期成果
本研究将建立一种基于多重PCR--液相芯片检测的呼吸道病毒靶序列富集方法，并初步在临床实践中应用。预期达到以下目标：
1.构建基于多重PCR反应体系的呼吸道病毒靶序列富集方法，实现对四种常见呼吸道病毒的特异性富集。
2.利用液相芯片检测技术对样本进行检测和分析，实现对呼吸道病毒的快速、准确和经济的检测。
3.验证该方法在灵敏度、特异性和重现性等方面的优势，并与传统的PCR检测方法进行比对。
4.初步应用于临床实践，评估该方法在临床应用中的可行性，并为临床医生提供更加准确、快速和经济的诊断和治疗方案。
五、研究计划
本研究总时限为2年。计划完成以下任务：
第一年：
1.完成研究方案的设计。
2.针对常见呼吸道病毒选择适当的靶序列并进行引物设计。
3.构建多重PCR反应体系，进行体系的优化和调试。
4.开发基于液相芯片检测的呼吸道病毒检测技术。
第二年：
1.对富集及液相芯片检测技术进行验证。
2.收集临床患者呼吸道标本，将该方法应用于临床实践中，并进行初步评估。
3.完成结果的统计分析和撰写相关论文。
六、参考文献
1.Wang,Y.,Xiao,T.,&Wei,L.(2016).DevelopmentofmultiplexPCRassaysfordetectionoffiverespiratoryvirusesinswine.Journalofvirologicalmethods,236,258-262.
2.Prabhakar,P.,Mahadevan,A.,&Siddalingeswara,K.G.(2014).Real-timePCR-basedmoleculardetectionofrespiratoryviralinfectionsinacuterespiratoryillness.Indianjournalofmedicalmicrobiology,32(1),10.
3.Huang,Y.P.,Pan,J.J.,Chang,C.K.,Chiu,C.H.,&Wen,Y.C.(2013).Rapiddetectionandidentificationofclinicallyimportantbacteriabyhigh-resolutionmeltinganalysisafterbroad-rangeribosomalRNAreal-timePCR.Clinicalmicrobiologyandinfection,19(4),E164-E170.