HE染色00.doc

我来一一解答你的疑问：1.“做大鼠皮下HE染色后可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况吗？”答：HE染色，即苏木精—伊红染色法，苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。HE染色后是可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况，因为炎症细胞有自身的特点，通常细胞核较大，核质比大，H&E染色后，细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。因此，H&E染色，尤其在400倍放大的情况下，可以明显看到一个个以蓝色为主的点状的炎症细胞（主要是中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞），而其他细胞则体积较大，细胞质较多成粉红色，细胞核较小，呈蓝色或深蓝色。2.“通过HE染色观察我的材料是否对皮下组织产生炎症反应，那么HE的结果包括哪些呢？”答：通过HE染色来评价是否有炎症反应以及炎症反应的强弱，通常有两种方法：炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量。1）H&E染色，在400倍下，是可以观察到明显的炎症细胞的，故可知道你的材料是否对皮下组织产生炎症反应；2）HE的结果通常用炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量来评价，并通过统计数据，做出柱状图来进行统计学比较。炎症细胞浸润区域的面积大小：可以用imagepro-plus(IPP)软件来计算，首先用软件中的选择区域图标选出你的炎性细胞浸润的区域，然后再点击areacount计算该区域的面积，作为该张图片的炎性区域的面积，依次类推，计算出10张同一组HE图片的面积，求平均值作为该处理组的炎症反应的强度，用此法计算其他组炎症的强弱，进而比较。高倍视野下平均炎症细胞的数量：计算方法类似，也可以用imagepro-plus(IPP)软件来计算，设置每个炎症细胞的参数，然后统计。如若不会用IPP软件，只好用笨的方法，自己人工计数，然后统计。3.“我做HE染色和VG染色，那么我取出皮下组织后直接固定在4%多聚甲醛或者10%甲醛溶液中，让公司的人自己分别取出一部分做HE和VG就可以了吧？不用分别固定吧？”答：做HE染色通常将取出的新鲜组织固定在10%的福尔马林溶液（4%的甲醛溶液）中12小时--72小时最佳，然后进行脱水机脱水，第二天石蜡包埋，然后切片，染色，拍摄。组织固定在10%甲醛溶液中时间不能太长，最好不要超过一个月，否则抗原容易脱失或失去特异性，那么该组织做免疫组化就不行，做HE染色组织片的颜色也会过重。对于取组织时，可以固定在一起，放入10%甲醛溶液中，放入脱水机时，最好分成两部分，最后包埋成两个石蜡块，可以切出来很多切片，用于做各种HE染色、IHC染色、TUNEL染色及你的VG染色等等。强烈建议，把组织包埋成石蜡块，以石蜡块的形式可以保存超过5年，随时可以拿出来做。当然如果你没有脱水机，也可以直接给公司包埋，然后让他们把蜡块还给你，以后你还可以做其他的。4.固定液选哪种更好呢？10%的甲醛溶液是用生理盐水配置的吗？答：作者明显是初学者。你可以拿试剂瓶核对一下，我们通常说的福尔马林就是39%-40%的甲醛溶液，而市场上买到的福尔马林也就是39%-40%的甲醛溶液，这是一个概念。对于H&E染色，毋庸置疑，国际公认组织的固定液通常是10%的福尔马林溶液，即4%的甲醛溶液。也就是拿瓶装的福尔马林溶液（39%-40%的甲醛溶液）进行1:10稀释即可。稀释液最好用中性PBS。即福尔马林溶液（39%-40%的甲醛溶液）和中性PBS进行1:10稀释。如果没有可用的PBS，用dd水配置也可以。很少听说用生理盐水配置的。PH值对于染色的结果，稍微有点影响，不过不是很严谨的片子的话，可以忽略。中性PBS配置最佳。H&E染色操作起来很简单，不怎么费脑子，按照步骤一步一步来即可。希望该帖子能够对你和你的实验有所帮助。