猪痢疾短螺旋体的分离、鉴定与血清抗体ELISA检测方法的建立.docx

猪痢疾短螺旋体的分离、鉴定与血清抗体ELISA检测方法的建立
Introduction
猪痢疾（swinedysentery）是一种由短螺旋菌属（Brachyspira）细菌引起的传染病，主要影响猪的肠道，引起腹泻、便秘、发热等症状。猪痢疾是猪场中常见的疾病之一，容易引起经济损失，特别是在养殖过程中控制不当时，疾病传播会非常迅速。因此，准确地诊断和控制猪痢疾非常重要。本文研究了猪痢疾短螺旋菌的分离和鉴定方法，并建立了一种血清抗体ELISA检测方法，为猪痢疾的控制和防治提供了实用性的方法。
MaterialsandMethods
菌株分离与鉴定
本研究采集了多个猪场的病猪粪便样本，将粪便样本按照常规方法进行制备和处理，然后接种到3%血琼脂培养基上，利用光学显微镜和API20E系统鉴定短螺旋菌属（Brachyspira）菌株。
病猪血清抗体ELISA检测方法的建立
根据短螺旋菌属（Brachyspira）的羧基酸乳酸激酶（LDH）基因序列，以此为模板设计合成特异性强的引物，PCR扩增短螺旋菌属（Brachyspira）的LDH基因片段，并将其重组为表达融合蛋白。该融合蛋白具有病原学价值，能诱导机体产生抗体。根据LDH蛋白的抗原性质，构建特定的ELISA检测方法，利用该检测方法对猪痢疾进行血清抗体检测。
Results
菌株分离与鉴定
通过菌株培养和常规鉴定，筛选到了一株短螺旋菌目（Brachyspira）的菌株，并通过API20E系统鉴定确认其属于短螺旋菌属。
病猪血清抗体ELISA检测方法的建立
融合蛋白的成功表达和纯化是建立检测方法的重要步骤。通过SDS-PAGE和Westernblotting方法，验证了蛋白的纯化和抗原性。然后，按照常规的ELISA方法，应用该融合蛋白为抗原，建立了一种病猪血清抗体ELISA检测方法。通过对不同血清样本的检测，进行阳性和阴性的判定，得到了良好的检测效果。
DiscussionandConclusion
本研究成功的分离了猪痢疾短螺旋菌属（Brachyspira）菌株，并通过API20E系统进行了鉴定。并且，通过构建特异性强的引物，进行了PCR扩增，重组融合蛋白，并成功建立了一种血清抗体ELISA检测方法。该检测方法具有检测速度快、灵敏度高、专一性好的特点，能够诊断和监测猪群中猪痢疾的发病情况，有助于猪痢疾的有效控制和治疗。本研究结果可为猪痢疾的防治提供一定的理论依据，并为相关血清学检测分析提供了实用的参考方法。