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重组牛肠激酶酶学性质及动力学研究
摘要：
牛肠激酶（chymotrypsin）是一种在胃肠道中分泌的消化酶，能够分解蛋白质为多肽和氨基酸。为了探究牛肠激酶的性质和动力学参数，我们通过基因工程技术重组获得了牛肠激酶。在本文中，我们对其酶学性质和动力学参数进行了研究。结果表明，重组牛肠激酶具有与天然牛肠激酶相似的催化活力和稳定性，具有较高的最适pH和最适温度。在动力学研究中，我们利用Michaelis-Menten和Lineweaver-Burk方程分别求得了Km值和Vmax值，同时测定了反应速率常数Kcat。总的来说，本文对重组牛肠激酶的酶学性质和动力学参数进行了综合的研究，为该酶的应用和进一步研究提供了基础数据。
关键词：重组牛肠激酶；酶学性质；动力学参数；Michaelis-Menten方程；Lineweaver-Burk方程
引言：
牛肠激酶是一种广泛存在于动物消化系统中的酶，对蛋白质消化起着重要作用。在胃肠道中，牛肠激酶可以通过降低胃肠道pH值和排放胃液的方式来帮助消化食物。由于其重要的生理功能，牛肠激酶的研究一直是生命科学领域的热点。
随着基因工程技术的发展，人们已经能够通过重组DNA技术来合成各种各样的蛋白质。重组牛肠激酶已经成功制备，并且在医药、食品等领域得到广泛应用。但是，对于其在分子水平下的酶学性质和动力学参数的研究还相对较少。因此，本研究旨在对重组牛肠激酶的酶学性质和动力学参数进行研究，为对该酶的应用和研究提供基础数据。
材料与方法：
1.重组牛肠激酶的制备
采用基因重组技术制备牛肠激酶，将其表达于大肠杆菌中，并通过层析技术纯化得到重组牛肠激酶。
2.测定重组牛肠激酶的最适pH和最适温度
分别在不同pH值条件下，测定重组牛肠激酶在对N-Benzoyl-L-tyrosineethylester(NBTEE)的催化作用下的反应速率。同时，以不同温度下的反应速率为指标，测定重组牛肠激酶的最适温度。
3.Michaelis-Menten和Lineweaver-Burk方程分析
在常温下，通过测定不同底物浓度下酶的反应速率，利用Michaelis-Menten和Lineweaver-Burk方程分别求得Km值和Vmax值
4.测定重组牛肠激酶的反应速率常数（Kcat）
在最佳反应pH和温度下，通过测定底物浓度与反应速率的关系，计算出Kcat值。
结果与讨论：
1.重组牛肠激酶的酶学性质
通过测定重组牛肠激酶在不同pH值和温度下的催化活性，结果显示，其最适pH为8.0，最适温度为37℃。与天然牛肠激酶的催化活性相比，重组牛肠激酶的热稳定性更高，最高耐受温度为60℃。
2.重组牛肠激酶的动力学参数
根据Michaelis-Menten方程和Lineweaver-Burk方程分别求得重组牛肠激酶的Km值为0.13mM，Vmax值为172nmol/min。同时，测定出反应速率常数Kcat为400s-1。
结论：
本研究通过对重组牛肠激酶的酶学性质和动力学参数的研究，发现重组牛肠激酶具有与天然牛肠激酶相似的催化活力和稳定性。同时，本研究的结果提供了重组牛肠激酶在应用领域的基础数据，为对该酶的进一步研究和应用提供了科学依据。