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大白鼠肝细胞膜的分离及其腺嘌呤磷酸酶的组织化学研究
摘要：
本研究旨在分离大白鼠肝细胞膜，并通过组织化学手段研究其中的腺嘌呤磷酸酶。通过超声破碎、多次离心、高速离心等步骤，成功地分离出了细胞膜，并经过SDS-PAGE电泳及Westernblotting检测到了腺嘌呤磷酸酶的蛋白质。随后进行了光学显微镜和电镜观察，并利用荧光染色技术证实了膜的完整性。最终，结果表明，大白鼠肝细胞膜的成功分离为后续的进一步研究奠定了基础。
关键词：大白鼠；肝细胞膜；腺嘌呤磷酸酶；组织化学。
引言：
膜是细胞内、外环境分隔的重要界面，它不仅保持着细胞内平衡，更起着很重要的生物学功能。膜上的蛋白质是执行这些生物学功能的主要参与者之一。通过对膜中的蛋白质进行分离和鉴定，可以更好地理解其功能以及与疾病发生的关系。因此，对细胞膜的研究具有重要意义。
腺嘌呤磷酸酶(AdenylateCyclase，AC)是一种细胞膜上的酶类，它通过转换ATP为cAMP，展开多种细胞信号通路的传导。因此，该酶在调节多种生理、生化过程中都起到了很重要的作用。尽管该酶的研究涉及较多的领域，但对其在大白鼠肝细胞膜中的位置和分布尚未有详细的报道。
方法：
1.动物培养
采用4周龄的雄性大白鼠。
2.细胞膜的分离
将肝后静脉取出后彻底排空，暴露后用盐水冲洗，用碎冰碎后缓冲液（2mMTris-HCl，1mMEDTA，1mMDTT，0.25mMPMSF）淋润。随后用液氧在超声细胞粉碎器中破碎。对溶胶离心取上清液，以1000g离心5min，收集沉淀，以10000g离心10min，去除奶油状物。收集沉淀，以16000g离心10min，去除细胞碎片上清液，细胞膜沉淀即获得。
3.电泳与免疫印迹
各组织样本按相同细胞膜蛋白量标准进行SDS-PAGE电泳。运用Westernblot的方法，使用1:500浓度的抗AC抗体适配物，显色检测，证明获得了腺嘌呤磷酸酶的蛋白质。
4.镜检
通过透射电镜观察膜的形态，并用各种荧光染色技术证明膜的完整性。
结果与讨论：
经过分离，我们成功地制备出了大白鼠肝细胞膜。通过Westernblotting检测，我们发现腺嘌呤磷酸酶的蛋白质出现在细胞膜样品中。光学显微镜和电镜的观察结果表明，细胞膜沉淀中的膜依然完整，不破裂和污染。
在不同环境下，腺嘌呤磷酸酶可以表现出不同的功能和分布模式。在心脏等不同的组织和器官中，该酶也存在各种不同的调节功能。本实验结果提示着这些功能或调节过程可能与细胞膜的局部微环境有关。
结论：
本研究成功的分离出了大白鼠肝细胞膜，并证实了其中含有腺嘌呤磷酸酶蛋白质。通过进一步的光学显微镜和电镜观察，证实了细胞膜的完整性。这些结果对于更好地理解腺嘌呤磷酸酶的功能及其在肝中的意义是具有指导意义的。
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