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抗人B型红细胞单克隆抗体的研究——Ⅰ.ZMB1细胞株的建立
抗人B型红细胞单克隆抗体的研究——Ⅰ.ZMB1细胞株的建立
摘要：本研究旨在建立一种抗人B型红细胞单克隆抗体的细胞株。通过多次细胞培养和传代，最终建立了一株名为ZMB1的细胞株。该细胞株可稳定地制备抗人B型红细胞单克隆抗体，具有较高的抗体效价和稳定性，为进一步研究提供了可靠的实验材料。
关键词：抗人B型红细胞单克隆抗体；细胞株；ZMB1
一、引言
抗人B型红细胞单克隆抗体广泛应用于临床医学、生物学和生化学等领域。因此，建立可靠的抗人B型红细胞单克隆抗体的细胞株对于深入研究其抗体效价及其在相关领域的应用有着重要的意义。
本文以建立一种抗人B型红细胞单克隆抗体的细胞株为目标，进行了探究和研究。
二、材料与方法
2.1实验仪器
细胞培养箱，生物安全柜，细胞离心机，CO2培养箱，荧光显微镜等。
2.2实验材料
1）BALB/c小鼠：8周龄，体质量18-22g；
2）人B型红细胞；
3）细胞培养液：Dulbecco修正的Eagle培养液（DMEM）；
4）牛血清，FBS；
5）抗生素：青霉素-链霉素溶液；
6）多聚低聚胺（PLL）；
7）亲和层析柱：ProteinGSepharose4FastFlow；
8）发光酶标试剂盒（ELISA）；
9）TEbuffer；
10）RNAsimpleTotalRNAkit；
11）Trizolreagent；
12）dTprimer；
13）MMLV逆转录酶；
14）PCR试剂盒；
15）Agarose；
16）1×TAE缓冲液。
2.3主要步骤
2.3.1BALB/c小鼠的免疫与淋巴细胞的制备
将BALB/c小鼠尾静脉注射人B型红细胞，制备淋巴细胞。
2.3.2细胞融合
将制备好的淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0（未使用HAT培养）按照一定比例混合，进行细胞融合。
2.3.3培养和筛选融合细胞
将融合细胞培养在含有HAT培养液的培养基中，进行筛选。
2.3.4单克隆细胞的建立
将已获得的原代克隆细胞无限制依次传代，在单克隆化传代过程中筛选出单克隆细胞。
2.3.5抗体生产和纯化
将单克隆细胞培养于含有FBS的DMEM培养液中，获得稳定的抗人B型红细胞单克隆抗体。最后通过亲和层析柱进行抗体的纯化。
2.3.6抗体效价的检测
利用发光酶标试剂盒进行抗体效价的检测。
2.3.7细胞株的鉴定
通过荧光显微镜观察细胞形态，利用dopamin-beta-hydroxylase（DBH）酶链转录反应验证其为小鼠细胞。
三、结果
3.1细胞融合
在培养误差和人员操作熟练度的影响下，进行了一个月的细胞融合实验，筛选出了可靠的融合细胞。
3.2单克隆细胞的建立和筛选
通过多次传代，筛选出了单克隆细胞。
3.3细胞的培养和抗体的生产
通过稳定培养，最终获得可以稳定制备抗人B型红细胞单克隆抗体的细胞株ZMB1。
3.4抗体的纯化和检测
通过亲和层析柱对抗体进行纯化，最终使抗体的效价达到稳定的水平。
3.5细胞鉴定
通过荧光显微镜观察细胞形态、鉴定细胞中DBH基因的表达情况，确定其为小鼠细胞。
四、讨论
建立一个可靠的抗人B型红细胞单克隆抗体的细胞株对于深入研究其抗体效价及其在相关领域的应用有着重要的意义。本文通过多次细胞培养和传代，最终建立了一株名为ZMB1的细胞株。该细胞株可稳定地制备抗人B型红细胞单克隆抗体，具有较高的抗体效价和稳定性，为进一步研究提供了可靠的实验材料。
总之，本研究为建立抗人B型红细胞单克隆抗体的细胞株提供了一个可行的思路和方法，该细胞株的建立为单克隆抗体的研究提供了有益的实验材料。