动物细胞培养技术课件说课讲解.ppt

动物细胞培养技术1.动物细胞的生长与培养1.1培养细胞的生物学特征体外培养细胞的分型细胞在体内、外的贴附方式：存在差异
体内：贴附是全方位,外形具有复杂的立体特征
体外：多数情况，细胞只有一个附着平面，外
形一般与体内时明显不同
贴附的固相表面：玻璃、聚苯乙烯塑料
按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型1、成纤维细胞型：名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的
来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：
真正的成纤维细胞：心肌，平滑肌，成骨细胞，
血管内皮
形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则
三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，
中有卵圆形核
生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，
细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独
的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起2、上皮型细胞：名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同
来源：来源于外胚层、内胚层细胞,如：皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡,上皮性肿瘤
形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核
生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动3、游走细胞型：
呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。
4、多型细胞型：
有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。（二）悬浮型：

见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。

概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长
或以机械方法使保持悬浮状态下生长
来源：自血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞
特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团
优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，
易于收获，可获得稳定状态
缺点：纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞分离无菌无毒害的环境(一)细胞培养无菌无毒环境细胞培养无菌操作基本技术(二)细胞的营养合成培养基的主要成分血清其它常用液体试剂(三)其它类似体内的环境(四)合理的计划，维持细胞性状一、细菌污染

细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细
胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能
因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌。
培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改
变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下
发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后
细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆
脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。二、真菌污染
真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节
进行细胞培养更易污染。最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔
子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。
培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的
小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下
可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基
中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边
和细胞之间。个体细小，有增多趋势。镜下看时，要将培养瓶
用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相
混淆。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒
性作用而使细胞脱落死亡。
三、支原体污染
支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微
生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除
它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发
现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素
有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。
电镜下可见其有三层结构，无细胞壁，中央有电子
密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。
培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生
长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细
胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，
还会产生交叉污染。四、病毒污染

采用组织细胞培养法生产疫苗，如果没有除去潜在
病毒的组织培养物，会产生病毒污染。目前，从原
代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。
尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗
是不安全的。若二倍体细胞系有SV40或多发瘤病
毒，B淋巴细胞含EB病毒，细胞会发生变异、转
化，形成异倍体的细胞系。五、非同种细胞污染
由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没
有严格分开，操作不当，往往会使一种细胞被另一
种细胞污染。如“灵长类”细胞系发现猴和鼠类细胞
的混合物，ERK/KD细胞是从兔肾中分离出来的，
而现在却认为是HeLa细胞。

非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发
生，大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底
而带入一些有毒化学物质所致。常用的排除微生物污染的方法1.3培养