发光法测定菌体ATP含量v知识课件知识讲稿.ppt

发光法测定菌体ATP含量一.实验目的二.实验原理当细胞受损或死亡时，其ATP值迅速下降或消失，基于这一原理，检测细胞内的ATP含量，即可反应细胞的存活状况，ATP浓度与活细胞数密切相关。
检测时先将ATP与提取剂充分混合，使细胞壁和细胞膜裂解，释放ATP，再加入荧光素-荧光素酶，ATP在荧光素和荧光素酶的作用下，使其释放磷酸基团同理发出荧光，用生物荧光仪检测相对荧光强度（relativelightunits,RLU）,由此测出ATP含量，进而反映活细胞数。2.ATP生物发光特点3.应用研究新药筛选及疗效评价：广泛应用于需要进行大量快速初选工作的新药筛选中。

细胞免疫活性检测应用：ATP生物发光法还可测定T细胞的免疫活性。
三.试剂取0.5ml的标准ATP试剂（10-7mol/l）到5ml的容量瓶中，加入缓冲液定容，得到10-8mol/l的标准ATP试剂。
用移液管取5ml的上述标准ATP试剂到50ml的容量瓶中，加入缓冲溶液定容，得到10-9mol/l的标准ATP试剂。
重复以上过程，得到10-10mol/l和10-11mol/l的标准ATP试剂。3.缓冲液4.ATP提取液四.实验材料与仪器五.操作步骤TCA法具体操作加热煮沸法具体操作2.ATP的检测标准曲线制作以ATP浓度的对数值为横坐标，荧光反应值RLUS的对数值为纵坐标，绘制标准曲线。

由标准曲线可见，在一定的范围内，ATP浓度与荧光反应发光值之间有较好的线性关系，样品中ATP浓度与相对发光值对应。
样品测定及结果