实验四细菌质粒的接合转移资料讲解.ppt

实验四细菌质粒的接合转移一：目的要求二：基本原理1．转移型质粒：多为低拷贝的大质粒，含有完整的转移操纵子基因（tra）和转移起始位点。能在同种或亲缘关系近的菌体细胞间进行转移。例如：
大肠杆菌：F因子、R1、R100、R6K、RP4……
天蓝色链霉菌：致育性因子pSCP1、pSCP2……

2．非转移型质粒：多为高拷贝的小质粒，如大肠杆菌的ColE1、RSF1010等。由于缺少转移基因（tra），不能自主转移，但由于含有与F质粒类似的bom（或nic）位点或诱动基因mob（mobilization），因而能被带有tra基因的转移性质粒诱动而发生转移。转移子的筛选三：实验菌株四：实验内容用可调定量移液器吸取供体、辅助菌各0.4ml，吸受体菌0.6ml，都加入同一eppdorf管内（每个同学做1管），放入离心机内，10000转/min离心1分钟。
倒上清，向沉淀加1ml的TY液体，用tip上下抽吸，洗涤菌体，再10000转/min离心1分钟，倒上清，留100μl左右用于悬浮菌体。
倒TY平板，然后用镊子取灭菌滤纸片贴于已准备好的TY平板上（每2个同学1片，2-3片/平板）。用200μl的tip抽吸eppdorf管内沉淀的菌体，打散成浓菌液，将之加到滤纸片中央（切勿倾斜平板，以免菌液流出滤纸片以外）,吹干。
28℃培养2天。倒SM平板向灭菌青霉素瓶中加3ml无菌水，将已培养的TY平板上的滤纸片用无菌镊子放入水中，在震荡混匀器上洗菌体，充分打散。
向1ml的ep管加0.9mL无菌水，取0.1ml菌液，混匀。吸取200μL涂皿。
少数同学另取稀释液，涂1板不加Tc的SM做对照。
平板放28℃培养4-6天后看结果。五：实验报告内容六：思考题