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ESBLs及AMPC的检测及研究进展
ESBLs及AMPC的定义及分类
（一）定义：
ESBLs：超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是一类新的β-内酰胺酶（BLA），属Bush分类中的2be类酶，主要产生于大肠埃希菌和克雷伯菌属，能水解三代头孢如头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟和单环酰胺类氨曲南，并被克拉维酸抑制。
AmpC酶：是染色体或质粒介导的头孢菌素酶，能水解三代头孢及单环酰胺类，不被CLA抑制剂和头霉素类抑制，能被四代头孢、碳青霉烯类抑制。产ESBLs+AmpC酶株对三代头孢、单环酰胺类、头霉素类及含酶抑制剂、四代头孢均高度耐药，可用碳青霉烯类及在药敏试验敏感的氨基糖苷类或氟喹诺酮类。
（二）分类：
ESBLs：按照BUSH的分类方法分为1-4组：一组由染色体编码的头孢菌素酶（C类酶）；二组由质粒介导的A类酶；三组由染色体介导的金属酶及四组由染色体介导的青霉素酶。
AmpC酶按其产生的方式3类:诱导高产酶、持续高产酶和持续低产酶
全国及宁波市感染状况
全国30-40%，宁波市66%多，宁波市真实数据应没有这么高。
ESBLs及AMPC的检测
ESBLS的检测
筛选试验
头孢泊肟、头孢他啶、氨曲南、头孢噻肟或头孢曲松（每片含量均为30微克），用M-H琼脂标准纸片扩散法测试抑菌环直径，按NCCLs（美国标准临床试验室标准委员会）标准进行判读，头孢泊肟和头孢他啶的抑菌圈均<=22毫米、氨曲南或头孢噻肟<=27毫米或头孢曲松<=25毫米，应高度怀疑为ESBLS菌株，进一步做确证实验。
确证试验
头孢他啶（30微克）、头孢他啶加克拉维酸（30微克和10微克）、头孢噻肟（30微克）头孢噻肟加克拉维酸（30微克和10微克），分别测量两种纸片单独及加克拉维酸的抑菌圈直径，大于等于5毫米可确认为ESBLs菌株。
AMPC的检测
表型筛选试验：采用K-B法，用头孢西丁检测受试菌，抑菌圈直径<18毫米为AMPC酶可疑阳性。
确证试验：
三维试验：a、酶粗提物的制备挑取血平板上过夜培养的菌落数个接种于20毫升胰大豆肉汤，35℃培养24小时。4℃，5000r/min离心15min。弃去上清液，加入0.1mol/l的磷酸盐缓冲液10毫升重悬，5000r/min再次离心15min，弃去上清液沉淀用0.1mol/l的磷酸盐缓冲液10毫升重悬，在冰浴中用超声波细胞粉碎仪破菌（或用反复冻融的方法破菌，但后者细菌的细胞膜不易破坏），取1.5ml破碎后的菌液，于4℃，20000r/min离心90min。弃沉淀，取上清于—20℃保存备用。
b、头孢西丁三维试验取0.5麦氏单位大肠埃希氏菌ATCC25922涂布于M-H琼脂，将30微克的头孢西丁纸片贴于平皿中心，距纸片5毫米处呈辐射状用刀片切三道沟槽，在三道沟槽中分别加入40微升的酶粗提物、酶粗提物加氯唑西林加舒巴坦、酶粗提物加氯唑西林。如产生蚀环现象则为产AMPC酶，（加了氯唑西林的未产生，因为AMPC酶活性可被氯唑西林所抑制）。
ESBLs及AMPC酶的检测还可采用等电聚焦及PCR基因测序等方法检测。
德灵仪器检测ESBLs的原理
NC31板中有两孔分别加入了4ug/l的头孢泊肟和1ug/l的头孢他啶，如果两孔完全未生长，则判为阴性，如果生长则判为阳性。新一代的按照NCCLS检测原理的反应板已经生产出，但尚未获得注册。
检测结果的修改
建议不用修改药敏结果，而由医生自行决定是否用与不用，因为也发生过产ESBLs菌株用头孢噻肟治愈的病例。