实训五培养基的制备与灭菌教学内容.ppt

实训五培养基的制备与灭菌一、实验目的

1.学会一般培养基的制备原理、方法。

2.掌握培养基及器皿的灭菌方法。培养基是根据微生物生长繁殖的营养需要，用人工方法配制而成的基质,其中含有水、碳源、氮源、无机盐及各种生长因子。培养基可为微生物的生长提供能源、组成菌体的原料，调节代谢活动。不同微生物对营养物质的要求各不相同。因此，配制培养基要根据微生物的营养特点。一般，培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基(或麦芽糖、蛋白胨培养基)。根据研究的不同，可以将培养基制成固体、半固体和液体三种形式，固体培养基的成分与液体培养基相同，仅在液体培养基中加入凝固剂作支持物，通常加入1.5～2.0％的琼脂，半固体培养基加入0.3～0.5％琼脂作支持物，有时也可用明胶或硅胶作为凝固剂。1.材料马铃薯、蔗糖、牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、琼脂、K2HP04、MgS04·7H2O、FeS04·7H20、NaOH、HCl。
2.用具试管、三角烧瓶、漏斗、量筒、吸管、烧杯、纱布、棉花、玻璃棒、pH试纸、铁架台、漏斗架、止水夹、电炉、台秤、硫酸纸、药匙、牛皮纸、线绳、标签纸、剪刀、解剖刀、镊子、白瓷盘、(比色盘)铁丝筐。1.培养基的制作方法
(1)称量按照培养基的配方，准确称取各成分于烧杯中。
(2)溶解、加热向上述烧杯中加入所需要水量，搅动，然后加热使其溶解。用马铃薯、豆芽等配制的培养基，须先将马铃薯或豆芽按其配方的浓度加热煮沸0.5h(马铃薯须先削皮)并用纱布过滤，然后加入其他成分继续加热使其溶化，补足水量，如果配方中含有淀粉，则需先将淀粉加热煮融，再加人其他药品，并补足水量。
(3)调节pH值初制备好的培养基往往不能符合所要求的pH值，故需用酸度计，pH试纸或用氢离子浓度比色计来矫正，用0.1mol/LNaOH或lmol/LHCl调至合适的范围。
(4)过滤用滤纸或双层纱布(中间夹一层脱脂棉花)趁热过滤。
(5)分装根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管或三角烧瓶内，管(瓶)口塞上棉塞(或硅胶泡沫塞)，用牛皮纸包扎管(瓶)口。培养基的分装①液体培养基：分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
②固体培养基：分装试管，每管装液量为管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过1/2为宜；倒平板的培养基每管装15～20mL。
③半固体培养基：分装试管一般以管高度1/3为宜，灭菌后制成斜面或垂直待凝成半固体深层琼脂。斜面的摆法(6)灭菌高压蒸汽灭菌，一般培养基0.1MPa，20-30min，含糖培养基为0.05MPa，30min。（一）根据配制培养基的步骤,按下列培养基配方配制培养基。
1.肉膏蛋白培养基(W/V)(培养细菌用)
牛肉膏0.3g琼脂2.0g
蛋白胨1.0g蒸馏水100ML
NaCl0.5gpH7.2-7.42.马铃薯(PDA)培养基(W/V)(培养霉菌用)
马铃薯20g蒸馏水100mL
蔗糖2.0gpH自然
琼脂2.0g
马铃薯汁制备：将马铃薯去皮，称量所需重量，切成小块,加水煮沸30min,纱布过滤，补足水量。3.高氏1号(W/V)(培养放线菌用)
可溶性淀粉2.0gFeSO40.001g
K2HP040.05g琼脂2.0g
MgS04·7H200.05g蒸馏水100mL
KNO30.1gpH7.6-7.8
NaCl0.05g1.加热溶化过程中，要不断搅拌，以免琼脂或其他固体物质粘在烧杯底上烧焦，造成烧杯破裂，加热过程中所蒸发的水分应补足。
2.pH值必须按各种不同培养基的要求准确测定。
3.所用器皿要洁净，勿用铜质和铁质器皿。保证容器外壁无水。4.分装培养塞时，注意不得使培养基在瓶口或管壁上端沾染，以免引起杂菌污染。
5.培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证杀菌效果和不损失培养基的必要成分，培养基灭菌后，必须放在37ºC温箱培育24h．无菌生长方可使用。棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，所以正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环。正确的棉塞是形状大小，松紧应与试管(或三角烧瓶)完全适合。过紧时妨碍空气流通，操作不便；过松时，空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中，达不到过滤杂菌的目的。棉塞过小往往易掉进试管内。正确的棉塞头较大，约有1/3在外，2/3在试管内。棉塞制作目前，有条件的实验室已使用.塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞，此处介绍棉塞的制作，以备不时之需。1.培养基的高压蒸汽灭菌
①需灭菌的物品(分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基)，棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好(防止锅内水汽把棉塞淋湿)，放人灭菌锅内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。②将灭菌锅盖的排气管插入套筒侧壁的