牛传染性鼻气管炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立.docx

牛传染性鼻气管炎病毒SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立
牛传染性鼻气管炎（IBK）是一种常见的牛类呼吸道传染病，由牛传染性鼻气管炎病毒（InfectiousBovineRhinotracheitisVirus，IBRV）引起。IBK对牛的生长发育和肺部健康状态都有影响，给养牛业带来了严重的经济损失。因此，建立一种可靠、灵敏的检测方法对于IBK的预防和控制非常重要。
SYBRGreenⅠ荧光定量PCR（PolymeraseChainReaction）是一种常用于病毒检测的方法，具有高灵敏度、高特异性和高准确度的特点。本论文旨在建立一种基于SYBRGreenⅠ荧光定量PCR的牛IBRV检测方法。
首先，我们选择了牛IBRV的保守基因作为靶序列进行扩增。通过文献研究和序列比对分析，我们确定了适合的引物序列，并经过合成和纯化。使用这些引物对牛IBRV的核酸进行扩增，将PCR产物进行电泳分离验证目标序列的存在。
然后，我们优化了SYBRGreenⅠ荧光定量PCR的反应体系。通过调节SYBRGreenⅠ浓度、引物浓度、模板核酸浓度以及PCR反应体系条件（如反应缓冲液、Mg2+浓度等），最优化反应条件。在SYBRGreenⅠ荧光定量PCR反应过程中，我们选择了一种合适的PCR仪，并对PCR仪的参数进行了设定，例如反应温度、反应周期和光信号采集时间等。
之后，我们进行了SYBRGreenⅠ荧光定量PCR的特异性验证。选取其他牛类呼吸道病毒（如牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞病毒等）作为负对照样本，并进行检测。结果显示，经过优化的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR只能检测到牛IBRV的靶序列，具有很高的特异性。
接下来，我们对SYBRGreenⅠ荧光定量PCR的灵敏度进行了评估。通过序列克隆和定量PCR法，制备了不同浓度的牛IBRV标准曲线。在这个实验中，我们确定了SYBRGreenⅠ浓度和PCR循环数。我们的实验结果表明，SYBRGreenⅠ荧光定量PCR可以检测到非常低的病毒核酸浓度，具有高灵敏度。
最后，我们应用该方法对实际野外样品进行了验证。我们收集了来自不同养殖场的牛鼻拭子样品，并进行了检测。通过与传统的病毒分离和特定免疫学检测方法的对比，我们发现SYBRGreenⅠ荧光定量PCR能够快速、准确地检测到IBRV的存在。
综上所述，本论文建立了一种基于SYBRGreenⅠ荧光定量PCR的牛IBRV检测方法。该方法具有高特异性、高灵敏度和高准确度的特点，可用于快速、准确地诊断和监测牛IBRV感染。该方法的建立对于牛IBK的预防和控制具有重要的意义。