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重组rHSA-hFGF21融合蛋白在毕赤酵母中的表达纯化及活性分析
重组rHSA-hFGF21融合蛋白在毕赤酵母中的表达纯化及活性分析
摘要：
人血清白蛋白（rHSA）和人成纤维细胞生长因子21（hFGF21）作为合成调节因子，在药物研发、基因治疗和生物技术等领域具有广泛应用的潜力。为了提高两者的稳定性和生物活性，本研究设计了rHSA和hFGF21的融合蛋白rHSA-hFGF21，并将其在毕赤酵母中进行表达纯化，最后对其活性进行分析。本研究结果显示，rHSA-hFGF21在毕赤酵母中高效表达纯化，并保持了hFGF21的生物活性，为进一步应用提供了可行性和基础支持。
关键词：表达纯化；活性分析；重组融合蛋白；rHSA-hFGF21；毕赤酵母
1.引言
人成纤维细胞生长因子21（hFGF21）是一种多肽分子，具有广泛的生物活性，如调节葡萄糖和脂肪代谢、抗炎、抗氧化等。近年来，在肥胖、糖尿病、心血管疾病等疾病的治疗中，hFGF21作为一种潜在药物靶点引起了广泛关注。然而，hFGF21的半衰期较短，稳定性差，限制了其在临床应用中的发展。
人血清白蛋白（rHSA）是血浆中最丰富的蛋白质之一，有良好的生物相容性和稳定性。通过将rHSA和hFGF21融合成rHSA-hFGF21融合蛋白，可以提高hFGF21的稳定性，并增强其在体内的药效。
本研究旨在将rHSA-hFGF21融合蛋白在毕赤酵母中进行高效表达纯化，并对其活性进行分析，为进一步的研究和应用提供可行性和基础支持。
2.材料与方法
2.1构建重组质粒
将rHSA和hFGF21基因通过PCR扩增并连接，构建rHSA-hFGF21的融合基因。将融合基因插入毕赤酵母的表达载体中，构建重组质粒。
2.2毕赤酵母表达纯化
将重组质粒转化入毕赤酵母，利用选择性培养基筛选出阳性克隆株。选取得到的阳性克隆株进行扩大培养，利用亲和层析和凝胶过滤层析纯化rHSA-hFGF21融合蛋白。
2.3活性分析
2.3.1Westernblot检测
将纯化的rHSA-hFGF21融合蛋白进行SDS-PAGE电泳分离，然后转膜到PVDF膜上。使用特异抗体进行Westernblot检测，判断融合蛋白的表达和纯化情况。
2.3.2生物活性测定
采用细胞增殖实验和细胞迁移实验等方法，评价纯化后的rHSA-hFGF21融合蛋白对细胞的生物活性。比较其与hFGF21的生物活性差异，验证融合蛋白的有效性。
3.结果与讨论
3.1rHSA-hFGF21在毕赤酵母中高效表达纯化
本研究成功构建了rHSA-hFGF21的融合基因，并将其插入毕赤酵母表达载体中。经过转化和筛选，获得了阳性克隆株。经过扩大培养和纯化，获得了高纯度的rHSA-hFGF21融合蛋白。
3.2rHSA-hFGF21保持了hFGF21的生物活性
Westernblot检测结果显示，纯化的rHSA-hFGF21融合蛋白能够特异地被hFGF21抗体识别，证明融合蛋白的表达和纯化成功。
生物活性测定结果显示，纯化后的rHSA-hFGF21融合蛋白能够促进细胞的增殖和迁移，与hFGF21有类似的生物活性。这表明，融合蛋白的构建没有影响hFGF21的生物活性。
4.结论
本研究成功地在毕赤酵母中表达纯化了rHSA-hFGF21融合蛋白，并验证其保持了hFGF21的生物活性。这为进一步利用融合蛋白在药物研发和医学应用中具有重要的潜力提供了可行性和基础支持。未来的研究可以进一步优化表达纯化条件，探索融合蛋白的药理学特性和临床应用前景。