菌落总数检测操作规程(国标word版)摘要.doc

山西梁汾醋业有限公司
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菌落总数测定标准操作规程制订年份：年制订人：审核人：批准人：制订日期：审核日期：批准日期：颁发部门：分发部门：生效日期：
菌落总数测定的标准操作规程
1.目的
规范山西老陈醋菌落总数测定的操作规程，保证山西老陈醋产品的质量。
2.适用范围
酿造食醋和配制食醋菌落总数的测定。
3.仪器设备
恒温培养箱，冰箱，恒温水浴箱，天平（0.1g）,均质器，振荡器；无菌吸管1ml(0.01刻度)、10ml(0.1ml刻度)或微量移液器及吸头；无菌锥型瓶，250ml/500ml;
无菌培养皿：直径90mm；PH计或精密PH试纸；放大镜或菌落计数器
4.培养基和试剂
4.1平板计数琼脂培养基，
成分：
胰蛋白胨5.0g
酵母浸膏2.5g
葡萄糖1.0g
琼脂15.0g
蒸馏水1000ml
PH7.0±0.2
制法：将上述加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节PH。分装试管或锥型瓶，121℃高压灭菌15min。
4.2磷酸盐缓冲液
成分：
磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g
蒸馏水500ml
PH7.2
制法：
贮存液：称取34.0g磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1mol/L氢氧化钠溶液调节PH,蒸馏水稀释至1000ml存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25ml,用蒸馏水稀释至1000ml,分装于适宜容器中，121摄氏度高压灭菌15分钟。
4.3无菌生理盐水
成分：
氯化钠8.5g
蒸馏水1000ml
制法：8.5克氯化钠溶于100ml蒸馏水中121摄氏度高压灭菌15分钟。
5检验程序

报告
计数各平板菌落数

计算菌落总数
培养
每皿中加入15ml-20ml
平板计数琼脂培养基，混匀
检样
25g(mL)样品+225mL稀释液，均质

10倍系列稀释
选择2-3个适宜稀释度的样品均液，
各取1ml分别加入无菌培养皿内

6操作步骤
6.1样品的稀释
6.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
6.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
6.1.4按1.4.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
6.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6.1.6及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46±1℃℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6.2培养
6.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。
6.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按1.4.2.1条件进行培养。
6.3菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。
6.3.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
6.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
7结果与报告
7.1菌落总数的计算方法
7.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。
7.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按