吸收试验标准操作规程(sop).doc

吸收试验标准操作规程
一、目的
为规范红细胞吸收试验的技术操作，保证结果的准确性，从而辅助血型的鉴定以及保证交叉配血的正确进行。
二、适用范围
输血科负责进行红细胞吸收试验来检测血型弱表达抗原等试验的技术人员。
三、原理
红细胞血型抗原（包括亚型等弱表达抗原）与相应抗体在一定条件下反应，抗体可逆性结合在红细胞血型抗原上，相应抗体效价下降或者检不出，进一步对吸收后红细胞做放散试验，可以从放散液中检出相应的抗体。
四、步骤和方法
（1）检测红细胞弱抗原
1、将受检红细胞用生理盐水充分洗涤3次，末次将盐水倒尽，制备成洗涤压积红细胞。
2、在压积红细胞中加入2倍容量含于检测目标抗原相对应的人源抗体血清，密封混匀。
3、根据目标抗原—抗体反应的特性分别放在不同条件下吸收：ABO血型系统弱抗原4℃至少1h，Rh血型系统弱抗原应放在37℃吸收30—60min，每10min混匀1次。
4、吸收后以1300g离心3min，取上层血清即为吸收液。测定人源抗体血清吸收前、后抗体效价。
5、结果判读：<1>如吸收后血清抗体效价比吸收前降低2个稀释倍数以上或者检不出抗体，则表明红细胞表达目标抗原。
<2>若效价无下降则表明红细胞不表达目标抗原。
<3>若效价下降未达到2个稀释倍数则不能确定红细胞是否表达目标抗原，需要对吸收后红细胞进行放散试验来决定受检红细胞是否表达目标抗原。
（2）冷自身抗体吸收
1、采集受检者2份标本：一份抗凝血约10ml，尽快置入37℃浴箱孵育30—60min，离心分离血浆和红细胞；另一份不抗凝血至少3ml，放置4℃自然凝固，使红细胞充分吸收冷抗体后，离心分离血清和红细胞。
2、用预温的37℃生理盐水充分洗涤从抗凝血标本中分离出的压积红细胞3—4次，取50微升加生理盐水1ml配成5%红细胞悬液，取1滴该悬液与2滴红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清反应，
120g离心１min后观察结果。根据是否凝集来确定冷抗体是否已洗涤干净。凝集的话继续洗涤直至洗涤干净后，将洗涤干净的红细胞分成3份，每份至少1ml。
3、取上述1份洗涤充分的红细胞与受检者不抗凝的血清等体积混合，置入4℃孵育30min，以1300g离心3min，取上清液即吸收后血清。
4、取吸收后血清2滴与洗涤干净的红细胞悬液1滴反应，120g离心1min，若有凝集表示吸收后血清还有冷抗体，需用第3份红细胞继续对其吸收直至冷抗体吸收干净。
5、用洗涤干净的红细胞悬液做血型鉴定或次侧交叉配血，用吸收完全的血清做主侧交叉配血试验。
（2）温自身抗体吸收
<1>热—酶处理细胞法
1、将2ml受检者压积红细胞用生理盐水洗涤4次，每次滤干。
2、加2倍于红细胞体积的生理盐水，混匀后置入56℃水浴中轻轻摇动5min，56℃保温1300g离心3min，去除上清液。
3、向压积红细胞加入木瓜酶应用液1ml混匀，37℃孵育15min，生理盐水洗涤红细胞3次，每次1300g离心3min，去除上清液。
4、将红细胞分为2份，1份加入受检者血清1ml混匀，37℃孵育30min，1300g离心3min取上层血清转入另1份红细胞中，重复一次即可吸收完全。
<2>二硫苏糖醇—木瓜酶处理法
1、取2支试管各加入1ml受检压积红细胞，再分别加2ml二硫苏糖醇—木瓜酶试剂，混匀37℃孵育30min。
2、生理盐水洗涤红细胞3次，每次1300g离心3min，滤干上清液。
3、向一支试管中加入1ml受检血清，混匀37℃孵育30min，1300g离心3min。取上层血清转入另一支试管中，重复1次，受检者血清自身温抗体即可吸收完全。
五、注意事项：
1、每次洗涤红细胞尽量去尽盐水，并且遵循离心条件。
2、检测红细胞弱抗原吸收试验的抗体血清应使用人源抗体血清，并且效价不宜过高以32为宜。如需对红细胞进行放散试验，可使用较高效价的人源血清。
3、自身冷抗体常需要多次反复自身吸收后才能吸收完全。
4、根据不同抗原—抗体反应特性决定吸收温度，如ABO为4℃为宜。