基因工程的基本操作步骤完整PPT.ppt

基因工程的基本操作步骤思考:利用大肠杆菌产生人胰岛素的大致培育过程?一、目的基因的获取1、从基因文库中获取目的基因提取某种生物的全部DNA某种生物的单链mRNA基因组文库和cDNA文库的主要区别2、利用PCR技术扩增目的基因可以在短时间内获得大量目的基因。
复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因
将目的基因导入动物细胞
有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。
三、将目的基因导入受体细胞
终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录
目的基因与载体的结合和导入
上是否插入了目的基因
三、将目的基因导入受体细胞
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
基因工程的基本操作步骤
反转录法：cDNA的合成流程图解(二)利用PCR技术扩增目的基因PCR技术扩增与DNA复制的比较表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构
三、将目的基因导入受体细胞
复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因
在遗传工程技术中,限制性内切酶主要用于()
终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录
四、目的基因的检测与鉴定
cDNA文库
将目的基因导入植物细胞
3、检测目的基因是否翻译成蛋白质
2、利用PCR技术扩增目的基因
三、将目的基因导入受体细胞
四、目的基因的检测与鉴定
四、目的基因的检测与鉴定
四、目的基因的检测与鉴定
提取某种生物的全部DNA
基因表达载体的构建-----------核心
基因工程的基本操作步骤
用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质
终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录
标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来基因表达载体的构建过程
①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构
②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键
③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少
④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因(关键步骤)归纳步骤（二）、鉴定（个体生物学水平）基因工程的基本操作程序巩固练习:
1.人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗生素抗性基因,该抗性基因的主要作用是()
A.提高受体细胞在自然环境中的耐药性
B.有利于对目的基因是否导入进行检测
C.增加质粒分子的分子量
D.便于与外源基因连接
2.在遗传工程技术中,限制性内切酶主要用于()
A.目的基因的提取和导入
B.目的基因的提取和检测
C.目的基因与载体的结合和导入
D.目的基因的提取与载体结合感谢观看