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基因工程的基本操作步骤思考:利用大肠杆菌产生人胰岛素的大致培育过程?一、目的基因的获取1、从基因文库中获取目的基因提取某种生物的全部DNA某种生物的单链mRNA基因组文库和cDNA文库的主要区别2、利用PCR技术扩增目的基因可以在短时间内获得大量目的基因。 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 将目的基因导入动物细胞 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 三、将目的基因导入受体细胞 终止子:位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断,能终止mRNA的转录 目的基因与载体的结合和导入 上是否插入了目的基因 三、将目的基因导入受体细胞 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 基因工程的基本操作步骤 反转录法:cDNA的合成流程图解(二)利用PCR技术扩增目的基因PCR技术扩增与DNA复制的比较表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 三、将目的基因导入受体细胞 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 在遗传工程技术中,限制性内切酶主要用于() 终止子:位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断,能终止mRNA的转录 四、目的基因的检测与鉴定 cDNA文库 将目的基因导入植物细胞 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 2、利用PCR技术扩增目的基因 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 提取某种生物的全部DNA 基因表达载体的构建-----------核心 基因工程的基本操作步骤 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA启动子:位于基因的首端的一段特殊的DNA片断,它是RNA聚合酶识别和结合的部位,有了它才能驱动基因转录出mRNA,最终获得蛋白质 终止子:位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断,能终止mRNA的转录 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将有目的基因的细胞筛选出来基因表达载体的构建过程 ①载体与表达载体的区别:二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶:既用到限制酶切割载体,又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接,两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞,必需以表达载体的方式携带进去。三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因(关键步骤)归纳步骤(二)、鉴定(个体生物学水平)基因工程的基本操作程序巩固练习: 1.人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗生素抗性基因,该抗性基因的主要作用是() A.提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B.有利于对目的基因是否导入进行检测 C.增加质粒分子的分子量 D.便于与外源基因连接 2.在遗传工程技术中,限制性内切酶主要用于() A.目的基因的提取和导入 B.目的基因的提取和检测 C.目的基因与载体的结合和导入 D.目的基因的提取与载体结合感谢观看

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