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微生物检验(28)

临床医学检验考试辅导《微生物检验》真菌检验●考点真菌的基本特性真菌微生物学检查方法念珠菌；隐球菌；曲霉菌；皮肤真菌
【内容讲解】
真菌：真核细胞型微生物，属于真菌界。具有典型细胞核，不含叶绿素，不分根.茎.叶。以寄生或腐生方式生存。由单细胞或多细胞组成的，细胞壁含几丁质和（或）纤维素。能进行有性生殖和（或）无性生殖。
第一节真菌的基本特性
一.真菌的分类
二.生物学性状
（一）真菌的基本形态单细胞真菌多细胞真菌二相性真菌呈圆形或椭圆形，常见的有酵母菌或类酵母菌，以出芽方式繁殖由菌丝和孢子组成，菌丝伸长分支，分枝交织成丝状体，称为丝状菌，又称霉菌在体内或体外含动物蛋白的培养基上37℃培养为酵母型真菌，而在体外普通培养基上25℃培养时霉菌型真菌如白假丝酵母.隐球菌。
如皮肤癣菌如球孢子菌.组织胞浆菌.芽生菌和孢子丝菌.副球孢子菌
（二）真菌的结构菌丝孢子菌丝：真菌在适宜环境中，由孢子生出芽管逐渐延长呈丝状。菌丝继续生长并向两侧分枝，交织成团，称为菌丝体。
孢子有性孢子：由同一个菌体或不同菌体上的两个细胞融合形成。
包括卵孢子.接合孢子.子囊孢子和担孢子。
无性孢子：由菌丝直接生成，并不发生细胞融合。
致病性真菌多为无性孢子。
无性孢子：
（三）真菌的培养与繁殖营养要求不高，最常用的为沙保弱培养基。
最适生长温度为22～28℃，某些深部病原性真菌在37℃生长良好，最适pH
5.0～
6.0。需要较高的湿度和氧气。
单细胞真菌中虽有少数酵母菌可以二分裂繁殖，但多数真菌是以出芽.形成菌丝.产生孢子以及菌丝分枝与断裂等方式进行繁殖。
真菌的繁殖力极强，但生长速度较慢。
真菌菌落有3种类型：
1.酵母型菌落：类似一般细菌菌落，菌落光滑.湿润.柔软.致密，显微镜检查可见圆形或椭圆形生芽细胞。
2.酵母样菌落：外观性状同酵母型菌落，但在菌落表面除有芽生细胞外，还有假菌丝伸入培养基中，如白色念珠菌。
3.丝状菌落：菌落疏松，呈棉絮状.绒毛状或粉末状，菌落正面和背面可显示各种不同的颜色，常作为鉴定菌种的参考。
（四）真菌抵抗力对热的抵抗力不强，一般60℃1h即被杀死。
对干燥.日光.紫外线及多数化学药品的耐受性较强。
用甲醛熏蒸被真菌污染的物品，可达到消毒的目的。
对常用抗生素如四环素.青霉素.链霉素等均不敏感，灰黄霉素.制霉菌毒.两性霉素等对某些真菌有抑制作用。
三.致病性
1.致病性真菌感染主要是一些外源性真菌感染，可引起皮肤.皮下及全身性真菌感染。
2.条件致病真菌感染主要是一些内源性真菌引起的，如假丝酵母菌.曲霉菌.毛霉菌等。
3.真菌变态反应性疾病在临床变态反应性疾病中有一部分是由真菌引起的。常见的变态反应性疾病有荨麻疹.接触性皮炎.哮喘等。
4.真菌性中毒有些真菌在粮食和饲料上生长，人.畜食用后可导致急性或慢性中毒，引起中毒的可以是真菌本身,也可以是真菌产生的毒素。
5.真菌毒素与肿瘤的关系近年来不断发现有些真菌产物与肿瘤有关，例如：黄曲霉毒素有较强致癌作用,摄入一定量的黄曲霉毒素可导致肝癌。
第二节真菌的基本微生物检验方法真菌检查方法，常用直接检查.培养检查，一般即可确定致病真菌的种类，必要时可用生化反应.皮肤试验.免疫学检查.核酸检查以辅助诊断。
一.真菌的直接检测法
（一）不染色标本的直接检查将少量标本置于载玻片上，加适量生理盐水，如为毛发.皮屑，须加10%～20%氢氧化钾，盖上盖玻片，并加热使标本组织溶解透明，用低倍镜和高倍镜检查，观察时有酵母型细胞.菌丝.菌丝体和孢子。若发现有真菌菌丝或孢子存在时可初步判定为真菌感染。
（二）染色标本检查观察有无酵母型细胞.菌丝.菌丝体和孢子。
1.革兰染色适用于酵母菌和类酵母菌的染色。
酵母型细胞和菌丝.孢子被染为革兰阳性。
2.墨汁负染色适用于隐球菌的检查。可见新型隐球菌具有宽厚荚膜。
3.乳酸酚棉兰染色适用于各种真菌的检查。
酵母型细胞，菌丝和孢子被染为蓝色。
4.瑞氏染色适用于检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞质菌。
（三）直接检测抗原用乳胶凝集试验.ELISA检测血清和脑脊液标本中的隐球菌抗原。
用胶乳聚集试验检测标本中白假丝酵母菌抗原。
二.真菌的培养检查法
（一）常用真菌培养基一般可选用沙保弱培养基。
无菌区标本,如血液.腹腔液.心包液.脑脊液.关节液等，一般采用自动化血培养系统进行培养。
大部分真菌在25～28℃生长良好，有些需要37℃培养，所有分离标本应孵育至少4周。
观察菌落生长情况是鉴别真菌的主要方法之一。
常用真菌培养基及用途：培养基用途沙保弱培养基深浅部真菌的常规培养皮肤真菌试验培养基分离皮肤真菌左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基分离新生隐球菌酵母浸膏磷酸盐琼分离荚膜组织胞浆菌和皮炎芽生菌马铃薯葡萄糖琼脂观察真菌菌落