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微生物检验(6)

临床医学检验考试辅导《微生物检验》微生物检验概述考点：临床微生物学检验的目的与要求标本采集与运送微生物学检查方法临床微生物实验室安全措施和质量保证
【内容讲解】
一.临床微生物学检验的目的
1.为临床感染性疾病的诊断提供病原学依据。
2.为临床感染性疾病的治疗提供参考用药的信息。
3.为医院感染提供病原微生物及其耐药性动态信息。
4.改进或更新临床微生物学检验的方法。
二.临床微生物学检验的要求
1.快速.准确地提出检验报告。
2.检验人员必须有较丰富的微生物学基础知识和熟练.正确的操作技能，必须养成有菌观点和无菌操作的习惯。
3.临床微生物学检验必须进行全面质量控制，并参加和接受质量控制考核。
4.重视实验室消毒灭菌工作。
三.诊断试验的选择原则
1.选择有鉴定价值的试验要对两种细菌进行鉴定，须选择一项两种菌呈现截然不同结果的试验，即一种菌呈现阳性（阳性反应的菌株阳性率须大于90%），另一种菌为阴性（阴性反应的菌株阳性率应小于10%），这项试验才有鉴定价值。否则，就没有鉴定价值。
2.选择简易.快速.方便的试验（1）鉴定一种细菌可能有多种特异的方法，没有必要逐一进行试验，只选择其中一或两种达到目的即可，多选无意义。如金黄色葡萄球菌凝固酶试验.耐热DNA酶试验.甘露醇分解试验均阳性，只选较简单的凝固酶试验就足够了。
（2）选择操作简便.快速的方法。
（3）选用复合培养基，一次操作可同时看几个生化反应，如克氏双糖铁（KIA），动力靛基质脲酶（MIU）等。
3.综合考虑试验的敏感性和特异性敏感性=所有阳性结果数／所有感染病人数，试验敏感性越高，假阴性结果就越少。特异性=阴性结果总数／未感染病人数，特异性越高，假阳性结果越少。试验的敏感性和特异性是相互联系的，试验的敏感性增加，会使特异性下降，反之亦然。
四.标本的采集和运送标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，是确保实验结果准确可靠的前提。
（一）标本采集的一般原则
1.早期采集：病程早期.急性期或症状典型时，而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。
2.无菌采集：应无外源性污染。
在采集无菌标本时，应注意对局部及周围皮肤的消毒；对于与外界相通的腔道，应由底部取活组织检查；对于从正常菌群寄生部位（如口腔）采集的标本,应明确检查的目的菌，在进行分离培养时，采用特殊选择性培养基。
3.根据目的菌的特性用不同的方法采集
4.采集适量标本：采集量不应过少，而且要有代表性，同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。
5.安全采集：采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染。同时也要注意安全，防止传播和自身感染。
（二）标本的处理一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌.淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检，而其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如尸检组织.支气管洗液.心包液.痰.尿等标本应保存在4℃环境中。脑脊液.滑膜液等则要在25℃保存。一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。
病人标本中可能含有大量致病菌，不管标本运送距离远近，都必须注意安全防护。标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按规定包装，由专人运送。
厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。
五.微生物学检查微生物学检查方法方法鉴定类型速度直接镜检初步诊断5～10min免疫荧光（直接法）快速诊断1～2h乳胶凝集快速诊断15～30min对流免疫电泳快速诊断2h气-液相色谱鉴定
1.5～2hDNA探针快速诊断.鉴定1～3天PCR快速诊断数小时微量鉴定系统鉴定3～6h常规法确定诊断数天或以上微生物学检验技术:
1.形态学检查
2.分离培养技术
3.生物化学试验
4.血清学试验
5.动物试验
6.免疫检测技术
7.发光分析技术
8.鲎试验（检测内毒素）
9.分子生物学技术免疫检测技术:微生物学中常用的免疫检测技术包括凝集反应沉淀反应补体结合试验免疫荧光技术酶免疫测定皮肤反应发光分析技术:依赖酶或化学反应释放能量引起发光物质（如鲁米诺.荧光素等）发光的检测方法。
具有操作简便.快速.敏感度高.无污染特点。
根据发光原理，主要分为生物及化学发光两种方法。
鲎试验（检测内毒素）:基本原理是内毒素在碱性金属离子存在下激活鲎试剂中凝固酶原转变为凝固酶，凝固酶使存在于鲎试剂中的凝固蛋白原生成凝固蛋白，产生凝胶。凝胶的形成速度及其坚固程度与内毒素浓度有关。鲎试验阳性表明有革兰染色阴性菌或内毒素血症,也可用于生物制品或注射液的内毒素污染检测。
分子生物学技术：对生物体的基因组DNA片段及其转录产物进行定