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微生物检验(10)

临床医学检验考试辅导《微生物检验》细菌的生物化学试验●考点碳水化合物的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验碳源和氮源利用试验各种酶类试验抑菌试验复合生化试验
【内容讲解】
不同细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又各具有不同的生物化学特性，为此，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。
一.碳水化合物的代谢试验原理：由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的虽能分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分解糖。据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。
1.糖（醇.苷）类发酵试验原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇.苷）类的酶，故分解糖类的能力不同，分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸.产气，有的仅产酸，故可利用此特点以鉴别细菌。
培养基：在培养基中加入0.5%～1%的糖类（单糖.双糖或多糖）.醇类（甘露醇.肌醇等）.苷类（水杨苷等）。
方法：接种，培养。
结果：产酸：培养基中的指示剂呈酸性反应。
产气：可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。
不分解：培养基中除有细菌生长外，无任何其他变化。
应用：是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。
2.氧化-发酵试验（0/F试验）原理：氧化型：仅在有氧环境中分解葡萄糖发酵型：在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖产碱型：在有氧或无氧环境中都不能分解葡萄糖培养基：HL（Hugh-Leifson）培养基方法：将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡（或其他矿物油），高度不少于1cm。将培养基于35℃培养48h或更长。
结果：开管封闭管产碱型氧化型+半乳糖苷酶试验（ONPG试验）原理：试剂：0.75MONPG溶液方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5min，加入0.25mlONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。
结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色。
应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。
本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。
4.七叶苷水解试验原理：培养基：七叶苷培养基.胆汁七叶苷培养基。
方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结果。
结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。
应用：主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别。
5.甲基红试验原理：培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基方法：将待检菌接种于上述培养基中，培养2～4d，于培养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。
结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。
应用：肠杆菌科：沙门菌属.志贺菌属.枸橼酸杆菌属.变形杆菌属（+）肠杆菌属.哈夫尼亚菌属（-）。
6.V-P试验原理：培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养48h后加入甲液（6%α-萘酚酒精溶液）和乙液（40%KOH溶液），振摇。
结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性。
应用：本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。
二.蛋白质和氨基酸的代谢试验原理：不同种类的细菌分解蛋白质的能力不同。细菌对蛋白质的分解，一般先由胞外酶将复杂的蛋白质分解为短肽（或氨基酸），渗入菌体内，然后再由胞内酶将肽类分解为氨基酸。
1.明胶液化试验原理：方法：将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于22℃培养7d，逐日观察结果。若用35℃孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察结果前，先置4℃冰箱内30min，再看结果。
结果：培养基呈液化状态为阳性应用：肠杆菌科细菌的鉴别：沙雷菌.普通变形杆菌.奇异变形杆菌.阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。
厌氧菌如产气荚膜梭菌.脆弱类杆菌等也能液化明胶。
多数假单胞菌也能液化明胶。
2.吲哚（靛基质）试验原理：培养基：蛋白胨水培养基方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养24～48h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。
结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。
应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。
3.硫化氢试验原理：培养基：醋酸铅培养基方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基，于35℃培养24～48h观察结果。
结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。
应用：主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如沙门菌属.爱德华菌属.亚利桑那菌属.枸橼酸杆菌属.变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。
4.尿素分解试验原理：培养基：尿素培养基方法：将待检