SDS-PAGE蛋白凝胶电泳.ppt

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）实验目的实验流程实验过程2.凝胶配制实验过程加入分离胶溶液pH8.81.SDS
2.-mercaptoethanol
3.bromophenolblue
4.Glycerol实验过程电流路径实验过程蛋白质的染色方法实验原理实验原理Pr为什么带负电实验原理实验原理实验原理实验原理实验原理实验原理实验原理PageRulerPrestainedProteinLadder
AprestainedSDS-PAGEMWmarkerwithcontrastingcoloredreferencebandsat10and70kDa.
注意事项思考题Tanon-1600数码凝胶图像分析系统
GIS1D图像分析软件(Ver.4.00)诱导前后蛋白表达差异电泳过程中的不正常现象2皱眉现象
由于垂直电泳槽的装置不合适引起的，特别是当明胶和玻璃板组成的“三明治底部有气泡”或靠近隔片的凝胶聚合不完全
处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。3“拖尾”现象
样品溶解不佳引起或分离胶浓度过大4“纹理”现象
样品中的不溶性颗粒引起的5偏斜现象
电极放置不平行或加样位置偏斜引起6-2整块胶分离的条带太宽
主要是未浓缩好的原因
处理办法：
适当增加浓缩胶的长度；
保证浓缩胶贮液的pH正确（6.7）；
适当降低电压；7.“鬼带”
“鬼带”就是在跑大分子、构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量要比目标条带大，有时不能进入分离胶。但它却与目标条带有相同的免疫学活性，WB反应中可见其能与目标条带对应的抗体作用。
处理办法：在加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；或可加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。谢谢!附：蛋白质的提取与定量方法提取原则哺乳类细胞的裂解液-RIPA蛋白酶抑制剂定量方法以双缩脲为基础的方法以双缩脲为基础的方法Bradford法选择蛋白质定量方法时应考虑