血凝抑制实验报告材料.doc

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血凝抑制实验报告材料

及红细胞时应在板内液面上方加样，以免交叉污染，验结果。
以便混加抗原影响试
加样、倍比稀释时应高度集中注意力，以免漏加、重复加样等。
3试剂的保存及配置
1禽流感血凝抑制试验所用的抗原、阳性血清应严格按照说明书的要求进行保存和配置，试验前应提前将其恢复至室内温。抗原的保存温度为-20°C,反复冻融会降低抗原的滴度，应避免反复冻融。
2PH7.2、0.01mol/L的PBS液的制备。
应尽量现用现配。
每次使用前应测PH值，以免时间过长而导致PH值发生改变。
由于PH试纸跨度范围偏大，PH值不易准确介定，因此采用酸度计准确测量PH值，以提高试验的精确度。
全部试验均釆用同一种稀释液。
3.31红细胞的制备。
为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1红细胞悬液时应选择采取2-3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。当然釆血的前提条件是要按十分之一釆血量比例在一次性注射器中加入抗凝剂，如肝素、枸椽酸钠、柠檬酸钠等。
釆血完毕后分装至2ml容量的圆底离心管中，因为通过2ml与1.5ml两种容量离心管相比较，放入1.5ml尖底离心管中的话，离心后，离心管底部红细胞不易与加入的PBS液混匀，易沉积在管底部，达不到洗脱干净的目的。
经20?3000r/min,5~10min,弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液，上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。
在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细胞。
制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。
3.4抗原液的配制
先做血凝试验测定效价，以抗原与红细胞完全凝集的孔为1HUA抗原，配制4HUA抗原应往前推算两孔，即除以4后的值。
每次做试验前，必须重新检测禽流感抗原的血凝效价，以免效价发生改变而导致抗原稀释倍数不准确，从而导致试验结果不准确。
为保证配制的抗原准确，还要进行抗原回滴试验。具体方法：做二排抗原回滴，在两排的第1?8孔各加25微升PBS,取4HAU抗原25微升加在两排的第1、第2孔，混匀，从第2孔倍比稀释至第4孔，弃去25微升，另一排同样。
从第2至第8孔补25微升PBS,以保持75微升总量不变，另一排同样。两排的第1至第8孔各加25微升1红细胞，震荡10秒钟。静置30分钟观察结果。这样在第1孔为4HAU抗原，第2孔为2HAU抗原，第3孔为1HAU抗原，第4孔为1/2HAU抗原，均为75微升总量，第5至第8孔为空白对照。
如果抗原回滴试验不成立，应相应调整抗原浓度直至回滴试验成立。因为如果抗原浓度过高，则所测定的抗体效价水平偏低，如果抗原浓度过低，则所测定的效价偏高。所以不调整抗原浓度至实验成立的话会对结果有很大影响。
4结果的判定
每次试验必须设阳性及阴性（空白）对照血清，判别试验是否成立。判读结果时，将酶标板倾斜45°,以孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒为凝集完全抑制。
5试验器具的清洗
每次试验完毕后，应将酶标板中液体甩净，然后用自来水反复冲净每个孔，再放入3Na0H中4小时，清水反复冲净，再放入3Hcl中4小时，清水反复冲净，再用蒸偏水反复冲洗几次，甩干水份，入干燥箱中干燥备用。实验用烧杯、加样槽、量筒等也应充分洗净、干燥。以免器具内有杂物、污物以及残留物从而影响试验结果。
四、小结
在进行禽流感血凝抑制试验时，应充分考虑到各方面的影响因素，提供的检测结果才会真实可靠，准确掌握禽类的免疫抗体水平，进而为科学防控禽流感提供理论依据。
【篇
二】血凝抑制实验报告
随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性。下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的注意事项及操作方法。
应用：
用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。
注意事项：
一、 样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常釆用四角加中间的随机取样法，并且确定适当的样品数量，一般1000只以下的鸡群采样率在2-5；
5000只以下1?2；
5000R以上0.5?1。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可釆血。方法是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馅水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结果。
每只鸡釆血量在1ml左右，不低于1ml,在室温下静置至血清自然析出。
二、 四单位抗原的准确性：要获得准确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得抗原的血凝价，尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。
三、 红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用