急性毒性实验终结版专家讲座.pptx

急性毒性试验急性毒性试验经口急性毒性试验（LD50）操作步骤
动物选择及性别识别
急性毒性试验普通首选哺乳动物，其中又以大小鼠最为惯用。大、小鼠主要依据肛门与生殖器之间距离来区分。远——♂、近——♀。成年鼠：雄性卧位可见睾丸，雌性可见腹部有12个乳头。
动物称重、编号和随机分组
应依据统计学标准进行随机分组。受试物剂量选择
对于一个新化学物质，剂量选择可参考同系物毒性或文件资料加以预计，先用少许动物以组距较大一系列剂量进行预试验，找出粗略致死剂量范围，然后再设计出正式试验剂量组
受试物配制
此次试验所用受试物是80％敌敌畏(DDVP)原液。按照事先设计剂量分别稀释配制为几个不一样浓度受试物溶液，而各个剂量组动物均给予相同单位体重体积受试化学物。剂量mg/kg原液量(g)原液量(ml)定容量(ml)原液量(ml)
36.440.11390.0813500.0948
51.020.15940.1139500.1327
71.430.22320.1594500.1858
1000.31250.2232500.2603
1400.43750.3125500.3642
1960.61250.4375500.5099灌胃操作
将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者，使动物上消化道固定成一直线
毒性作用/中毒症状和动物死亡情况观察
高剂量组动物死亡常很快发生，染毒后应即刻亲密观察。观察和统计中毒症状及出现时间，死亡数量和时间及死亡前特征。按照试验结果，填写急性毒性试验统计表。
中毒症状观察：兴奋、流涎、肌震颤、抽搐、管状尾、呼吸减慢、呼吸困难、四肢无力、站立不稳、大小便失禁、大剂量侧卧以致死亡。 改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计方法，又称Karber法或平均致死量法。本法要求每个染毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈<20%，最高剂量组死亡率>80%。 依据试验动物中毒症状、死亡时间、特征和LD50，按受试物种类，分别参考对应经口急性毒性分级标准进行评定，判断该受试物毒性大小及毒性特征。
健康成年小鼠若干只（按每组5~6人，每组10只动物，♂♀各半）、50ml容量瓶(每组1个)、加样器（200μl、1000μl）、加样枪头、DDVP原液、1ml玻璃注射器、灌胃针头（每组2套）、棉签、染液、LD50统计纸、小鼠笼（每组2个）、电子天平（2台）、搪瓷托盘（每组一个）、受试物、苦味酸酒精饱和液、0.5%品红溶液或其它染色剂。经呼吸道急性毒性试验（LC50）静式呼吸道吸入染毒：
优点：设备简单、操作方便、消耗受试物少、适合用于小动物
接触易挥发液态化合物急性毒性研究。
缺点：受试物浓度难维持恒定，而且试验动物有经皮吸收
可能。
动式吸入：
优点：能即时补入新鲜空气和排出污浊空气，氧分压，二氧
化碳分压，温度、湿度，受试物浓度保持恒定。
缺点：设备复杂，消耗受试物多、易污染环境染毒柜内受试物浓度计算试剂和材料
试验动物及器材
健康成年小鼠若干只，（每组10只，♂♀各半），小鼠笼（每组2个）。静式吸入染毒柜6个、吸管、动物秤、统计纸。
试剂
受试物（易挥发液体，苯（原液））、苦味酸酒精饱和液、0.5%品红溶液或其它染色剂。操作步骤
选择健康试验动物，称重（准确到0.1g），编号，随机分组。
剂量分组

呼吸道吸入染毒：
依设计剂量浓度及染毒柜体积，计算需要加入受试物量。将5♂、5♀共10只小鼠→放入静式染毒柜内→加盖（注：每只小鼠每小时所需要气积为3L）。将液态受试物经加药孔加到接物蒸发器（纱布、滤纸、蒸发皿或小型加热器）上→开启小风扇，计时→观察、统计中毒症状和动物死亡情况。染毒结束后，关闭电源，打开盖子，驱走柜内残余含毒空气，取出动物，存活者归笼继续观察。（症状：呕吐、昏迷、抽搐、呼吸麻痹而死亡）
LC50计算：同LD50急性毒性试验观察和统计内容主要包含4个方面：中毒体征及发生过程、死亡情况和时间分布、体重和病理形态学改变。
观察和统计中毒症状及出现时间，死亡数量和时间及死亡前特征。急性毒性试验观察周期普通为14天，LD50或LC50计算时以观察周期内各组动物总死亡数为依据。依据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。按照试验结果，填写急性毒性试验统计表。结果评定/结果评价
依据试验动物中毒症状、死亡时间、LC50及急性毒作用带，参考对应急性毒性分级标准，评价毒物急性毒性强弱，判断该受试物毒性大小及其毒性特征。试验汇报注意事项