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兽医微生物学实验讲稿(精)5篇

第一篇：兽医微生物学实验讲稿(精)兽医微生物学实验讲稿动物科技学院预防兽医学教研室胡桂学实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革蓝氏染色法一、目的1．学会显微镜特别是油浸镜的使用方法2．认识细菌形态、排列与特殊结构3．学会细菌涂片制备方法，掌握革蓝氏染色方法二、实验内容（一）显微镜的构造和使用1．构造：机械部分，光学部分。2．使用方法与注意事项。（二）细菌形态与结构的观察：球菌、杆菌，荚膜、芽孢等。（三）细菌涂片的制备与染色方法1．涂片的制备：液体材料，固体材料，组织脏器2．干燥：自然干燥，火焰干燥3．固定：化学固定，火焰固定4．染色方法：单染法，复染法革蓝氏染色原理。革蓝氏（Gram`s）染色法：涂片干燥固定，草酸铵结晶紫染色2分钟，水洗，革蓝氏碘液媒染2分钟，95%酒精脱色30秒钟，稀释石炭酸复红复染2分钟。三、实验报告内容1．显微镜油镜的使用方法及注意事项。2．绘制2种细菌镜下图及自制的革蓝氏染色镜下图，注意细菌形态结构，两端形态及颜色。第二篇：微生物学实验细菌群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定细胞数目的方法有显微镜直接计数法(directmicroscopiccount)、平板菌落计数法(platecount)、光电比油法(turbidityestimationbyspectrophotometer)、最大或然数法(mostprobablenumberMPN)以及膜过滤法(membranefiltration)等。测定细胞物质的方法有细胞干重的测定，细胞某种成分如氮的含量、RNA和DNA的含量测定，代谢产物的测定等。总之，测定微生物生长量的方法很多，各有优缺点，工作中应根据具体情况要求加以选择。本实验主要介绍生产、科研工作中比较常用的显微镜直接计数法、平板菌落计数法和光电比浊计数法。一显微镜直接计数法（一）目的要求1．明确血细胞计数板计数的原理。2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。（二）基本原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。除了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，此法一般用于牛乳的细菌学检查。显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操作简单。但此法的缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。目前已有一些方法可以克服这一缺点，如结合活菌染色微室培养（短时间）以及加细胞分裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的。本实验以血球计数板为例进行显微镜直接计数。另外两种计菌器的使用方法可参看各厂商的说明书。用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各列有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图l5-1。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格(图15—2)；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为lmm，则每一个大方格的面积为lmm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.lmm，所以计数室的容积为0.lmm3(万分之一毫升)。图15—1血细胞计数板构造（一）图15—2血细胞计数板构造（二）A.正面图；B.纵切面图；放大后的方格网，中间大方格为计数室1.血细胞计数板；2.盖玻片；3.计数室计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成lml菌液中的总菌数。设五个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，如果是25个中方格的计数板，则1mL菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000A·B（个）同理，如果是16个中方格的计数板，1mL菌液中的总菌数=A/5×16×104×B=32000A·B（个）（三）器材1．菌种酿酒酵母2．仪器或其他用具血细胞计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细滴管。（四）操作步骤l．菌悬液制备以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。2．镜检计数室在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有