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动力学荧光分析法的简要论述

第一篇：动力学荧光分析法的简要论述对动力学荧光分析法的简要论述动力学荧光分析法是荧光分析新技术中的一种，通常利用慢反应，在反应开始之后和到达平衡之前的某一期限内进行测量。由于化学反应的速率与反应物的浓度有关，在某些情况下还与催化剂（有时还包括活化剂、阻化剂或解阻剂）的浓度有关，因而，可以通过测量反应的速率以确定待测物的含量，这正是动力学分析法定量测定的依据，所以该法也称为反应速率法[1]。动力学分析法的特点动力学测量是一种相对的测量值，只测量反应检测信号的变化。在反应过程中，那些不参与反应的物质或仪器因素，对于反应监测信号值的贡献保持不变，因而并不干扰。其次，某些类似的物质，虽然也能发生反应，但反应速率不同，这样便有可能创造一定的条件，使得在测量期间内只有待测物的动力学贡献才是有意义的。这两种原因，使得动力学分析法有可能比平衡法具有更好的选择性。动力学分析法还具有灵敏度很高、操作比较快速、易于实现自动化和可用来测定密切相关的化合物等优点。当然，动力学分析法也有它的某些限制[2]。首先，所使用的反应半衰期应在5ms-1h之间。其次，要必须严格的控制温度、ph、实际浓度、离子强度等反应条件和其他可能影响反应速率的因素。第三是动力学测量的信噪比在本质上要比平衡法小，因为只有反应的一小部分被用于测量。2动力学分析法的类型动力学分析法主要包括如下三种类型：非催化法、催化法、酶催化法。非催化法是通过测量非催化反应的速率而测定某种反应物的浓度。此法的灵敏度和准确性都不比催化法，不过它常用于有机物的分析。基于各种相似组分与同一试剂的反应速率的差异，可应用差示动力学分析法进行同时测定。催化法是以催化反应为基础来测定物质含量的方法。在合适条件下，催化反应的反应速率与催化剂的浓度成正比，因此，可用于测定某些对指示反应有催化作用的痕量物质，也可用于测定某些对催化反应起助催作用或抑制作用的物质。由于测量的对象并非催化剂本身，而是经“化学放大”了的其他物质，因而此法的灵敏度很高，检测限常可达ng或pg级。酶催化法则是基于酶催化的反应，这类反应的突出特点是它的特效性和高灵敏度，不仅可用来测定酶的活性，也可用来测定底物、活化剂和抑制剂。在合适条件下，酶催化反应的初始速率与酶浓性成正比，当底物浓度较低时，初始速率也正比于底物的浓度。同时，酶催化反应的初始速率也与活化剂的浓度呈正比，与抑制剂的浓度成反比。上述三种方法中，催化法尤其是酶催化法更为人们所青睐。不过，这里值得一提的是，酶催化法虽然具有高灵敏度和特效性的优点，但也具有酶的不稳定性、存储期短和价格昂贵的缺点，所以模拟酶的研究一直是人们所致力的工作。应用动力学荧光分析法在实际应用中非常广泛。如，利用酶催化法可进行每的测定及底物的测定。利用非催化法可进行无机物的测定和有机物的测定。先如今，动力学荧光分析法已经成为一种成熟的分析方法，随着科学事业的发展，我们将会进一步对其原理、特点和发展状况做出更深的研究。参考文献[1]许金钩，王尊本.荧光分析法.科学出版社，2006,7(3):221-240[2]陈国树。催化动力学分析法及其应用.南昌：江西高校出版社，1991.第二篇：时间分辨荧光分析法时间分辨荧光分析法（Timeresolvedfluoroisnmunoassay,TRFIA）是近十年发展起来的非同位素免疫分析技术，是目前最灵敏的微量分析技术,其灵敏度高达10^(-12)g/ml[1]，较放射免疫分析（RIA）高出3个数量级。它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。由于其高灵敏度，在临床上得到了广泛的应用，逐渐代替了放射免疫分析。[1]在生物流体和血清中的许多复合物和蛋白本身就可以发荧光，因此使用传统的发色团进而进行荧光检测的灵敏度就会严重下降。大部分背景荧光信号是短时存在的，因此将长衰减寿命的标记物与时间分辨荧光技术相结合，就可以使瞬时荧光干扰减到最小化。时间分辨荧光分析法（TRFIA）实际上是在荧光分析（FIA）的基础上发展起来的，它是一种特殊的荧光分析。荧光分析利用了荧光的波长与其激发波长的巨大差异克服了普通紫外-可见分光分析法中杂色光的影响，同时，荧光分析与普通分光不同，光电接受器与激发光不在同一直线上，激发光不能直接到达光电接受器，从而大幅度地提高了光学分析的灵敏度。但是，当进行超微量分析的时候，激发光的杂散光的影响就显得严重了。因此，解决激发光的杂散光的影响成了提高灵敏度的瓶颈。解决杂散光影响的最好方法当然是测量时没有激发光的存在。但普通的荧光标志物荧光寿命非常短，激发光消失，荧光也消失。不过有非常少的稀土金属（Eu、Tb、Sm、D