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基因工程5篇范文

第一篇：基因工程基因工程添加时间：2008.10.29|作者：admin基因工程实验注意事项1．上实验课的学生每三人分为一个小组。2．课前要预习实验内容，弄懂实验设计的原理，理清实验顺序。认真制定实验方案（没有方案或方案不合理者不能进入实验操作）。3．实验指导中所写的实验一、实验二等并非严格的实验顺序，只是提供一种相关的实验操作技术。各小组学生应根据整体的实验策略制定自己的实验顺序和计划。4．由于实验内容多，时间短，多数实验需要同时或穿插进行，一定要做好统筹安排。5．本实验课中的所有单项实验都属于一个整体流程。实验时间安排上没有上下午晚上等严格的作息安排，一切服从实验进度，必须在两周之内完成。6．实验的每一步都要详细地记录操作内容、时间、步骤、结果等，以备查询！7．对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作（尤其是微量移液器和离心机！）。在操作的过程中发现任何意外的现象都要及时向任课教师汇报。8．写作实验报告和实验论文一定要文理通顺、逻辑清晰、图表说明详细，讨论分析透彻（包括操作的错误）。9．在实验室内不能大声喧哗。10．在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾筐里（或先放在自己的桌面一角），严禁随地投弃！特别注意对废弃细菌的杀灭和有毒垃圾的定点投放。11．实验结束后要把用过的器皿清洗后归放整齐并清点数目，向教师汇报征得同意后方可离开实验室。12．值日组的同学最后离开，等待清扫实验室的卫生，关闭门窗水电。13．实验时损坏的任何物品都要及时申报。实验流程参考图PCR扩增CHI制备感受态菌XL1-Blue提质粒pBS-CHI，Pinpoint™xa-311ppMD18-TppMD18-TEcoRV+BamHI酶切与pUCm-T连接转化XL1-Blue筛选鉴定提重组质粒pUCm-T-CHI回收Pinpoint™xa-3EcoRV+BamHI酶切回收CHI片段重组质粒Pinpoint™xa-3-CHIIPTG诱导表达SDS-PAGE检测转化XL1-Blue与Pinpoint™xa-3连接Pinpoint™xa-3pBS-CHIXL1-BlueXL1-BlueBL21（DE3）筛选鉴定提重组质粒Pinpoint™xa-3-CHI转化XL1-Blue重组质粒pUCm-T-CHI第一部分质粒DNA的提取和酶切电泳鉴定实验一质粒DNA的小量制备1．目的学会最常用的小量制备质粒DNA的碱裂解方法。2．原理根据共价闭合环状质粒DNA与线性DNA在拓扑学上的差异来分离。在pH12.0~12.5这个狭窄的范围内，线性DNA双螺旋结构解开而被变性。尽管在这项的条件下共价闭合环状质粒DNA也会变性，但两条互补链彼此互相盘绕，仍会紧密结合在一起。当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液使pH恢复中性时，共价闭合环状质粒DNA复性快，而线性的染色体DNA复性缓慢，经过离心与蛋白质和大分子RNA一起沉淀下去。3．器材超净工作台，接种环，酒精灯，台式离心机，旋涡混合器，微量移液取样器，1.5ml微量离心管，恒温摇床，摇菌试管，双面微量离心管架，试管架，标签纸，磁力搅拌器等。4．试剂Pinpoint™xa-3质粒载体菌，pBS-CHI载体菌，LB培养基1000ml（含100µg/ml氨苄青霉素），葡萄糖/Tris/EDTA(GTE)溶液（溶液I），NaOH/SDS溶液(溶液II)，KAc溶液（pH4.8）(溶液III)，RNaseA，95%乙醇，70%乙醇，TEbuffer（pH8.0）。5．实验准备氨苄青霉素储存液（无菌水配制5mg/ml，分装后-20°C保存），配制LB培养基（胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g加200mlddH2O搅拌完全溶解，用约200ml5NNaOH调pH至7.0，加ddH2O至1L，121°C20min灭菌）；溶液I（50mmol/L葡萄糖，25mmol/LTrisHClpH8.0，10mmol/LEDTApH8.0）；溶液II（0.2mol/LNaOH，1%SDS）；溶液III（60ml5mol/LKac，加冰乙酸调pH4.8，补ddH2O至100ml），75%乙醇（-20°C保存），TEbuffer（10mmol/LTrisHClpH8.0，1mmol/LEDTApH8.0）；10mg/mlRNaseA（RNA酶A溶于10mmol/LTrisHClpH7.5，15mmol/LNaCl中）；摇菌试管洗净并盖上棉塞、1.5ml离心管装入铝制饭盒、移液器吸头装入相应的吸头盒，一起高压灭菌（121°C30min）。6．操作步骤（1）在超净工作台中取5mlLB（Amp），加入灭菌的摇菌试管中。（2）从超低温冰箱中取出保存Pinpoint™xa-3载体的菌种和pBS-CHI的菌种（操作完后迅速把菌种放回超低温冰柜中，切