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金线莲组培快繁技术研究

第一篇：金线莲组培快繁技术研究金线莲组培快繁技术研究【摘要】目的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体，开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究，并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好；不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0mg/L+NAA0.5～1.0mg/L，两个月增殖倍数达5.0以上；壮苗最适培养基为1/2MS＋NAA3.0mg/L＋6-BA0.5mg/L＋香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份＋2～3mm粗砂2份（或1份）＋木屑1份（或2份），3个月成活率均达100%，且生长良好。结论采用上述方法，能实现金线莲幼苗的快速繁殖。【关键词】金线莲；快速繁殖；增殖；生长；移栽金线莲Anoectochilusroxburghii（wall.）lindl为兰科开唇兰属多年生草本，别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等，是我国传统珍贵药材，素有“金草”“神药”“乌人参”等美称，在民间应用范围较广，广泛应用于风湿性关节炎、高血压病、糖尿病、肾病等疑难杂症的治疗和强身健体、病后体虚恢复等方面，在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材，特别在台湾省更是备受青睐，被称为“药中之王”［1，2］。金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，自然萌发率和繁殖率低，目前市场上货源主要来自于野生采挖，产品一直处于供不应求的状况。近年来，随着对其药效学和临床应用研究的深入，对金线莲药用价值的认识进一步提高，其市场货源紧缺的状况更为严峻，野生资源也不断遭到破坏性采挖，以致于处于濒临灭绝之地。本研究旨在采用组织培养技术，解决金线莲种苗来源，加快人工栽培，以保护金线莲野生资源、稳定市场供应。现将有关实验结果如下。1材料与方法1.1材料无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源，其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。1.2无菌繁殖体系的建立取生长健壮、无病虫害的植株，去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3～5min，然后用流水冲洗30min。在超静工作台前，用75%酒精湿润5～6s，放入0.1%的HgCl溶液灭菌12～13min，用无菌水冲洗5～6次。将消毒好的茎按上段（具茎尖）、中段和下段（匍匐茎段）切成长约1.5～2cm，带有1～2个节间的小段，分别接种于MS+6－BA4.0mg/L+NAA0.4mg/L培养基上，pH5.6，蔗糖2.5%，琼脂0.7%。培养条件为：温度(25±2）℃，光照时间12h/d，光照强度1500～2000lx。1.3不定芽诱导1.3.1基本培养基对不定芽诱导的影响采用单因素实验，培养基选用MS（Murashige-Skoog）［3］，1/2MS（大量元素减半，其他成分不变），VW(Vacin&Went)，B5（Gamborg·Miller&Ojima）和KC(KnudsonC)等5种，分别添加6－BA4.0mg/L，NAA1.0mg/L。1.3.2激素对不定芽诱导的影响以MS为基本培养基，添加不同种类及浓度的细胞分裂素和生长素。上述实验选取无菌健壮植株，切取长约1～1.5cm，带有一个节间的茎中段，每处理接10个茎节，重复3次。培养期间定时观察不定芽生长情况，培养60d后统计不定芽数。其它条件同实验“1.2”项。1.4壮苗培养1.4.1激素对幼苗生长和发根的影响以1/2MS为基本培养基，NAA设1～5mg/L5个处理，6－BA设0.5，1.0和1.5mg/L3个处理，共15个处理。1.4.2添加物对幼苗生长和发根的影响以1/2MS＋NAA2.0mg/L＋6－BA0.5mg/L为基本培养，考察马铃薯提取物、香蕉提取物、苹果提取物、椰子汁等4种天然有机物和活性炭对金线莲幼苗生长的影响。上述每种培养基均接入经增殖培养高约3cm，具3～4节间、有1～2片的无根幼苗，每处理接种接无根幼苗10株，重复3次。培养后每隔15d观察生长情况1次，至3个月考察每株净增加的叶片数、重量及发根数，并进行数理统计分析。1.5移栽选苗高约6～8cm，茎基直径约2mm，丛生根有2～3条的试管苗，炼苗4d后，洗净附着在植株上的培养基，并晾干洗涤水后移人直径为15cm，装有不同基质的土盆中，考察不同基质对金线莲试管苗成活率的影响。移栽前，实验基质均用45%多菌灵可湿性粉剂800倍溶液浇透消毒。实验条件为遮荫度80%的荫棚，保持空气相对湿度的80%～90%。如发现有病死植株，及时拔除。每处理5盆，每盆种5株，重复3次，移栽3个月后考察成活株数，并进行数理统计分析。2结果2.1无菌繁殖体系的建立实验表明，外植体茎段的分化程度对诱导结果存在一定的影响。从表1可知，上、中段茎均能萌动生长。上段茎因有顶芽的存在，顶端优势表现较为强烈，因而