微生物活菌计数方法专家讲座.pptx

微生物计数方法种类直接计数法1.显微镜直接计数显微计数法适合用于各种含单细胞菌体纯培养悬浮液血球计数板：菌体较大酵母菌或霉菌孢子细菌计数板：普通细菌用途：快速了解发酵液菌数。惯用于生产线上生产过程控制。缺点：不易区分颗粒、死菌体和杂菌，计数与真实菌数有很大差异。不能作为正规计数方法。2.比浊法依据菌悬液透光量间接地测定细菌数量。细菌悬浮液浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。依据浊度计算出细菌数量。该方法普通能够预计出细菌数量级。经惯用于一些特殊微生物快速计数，如光合细菌和藻类测数。不过因为该方法仅能估测菌数，不能准确定量，而且因为一些颗粒和添加剂作用，不能正确反应该样品质量，所以在质检过程中不予采取。3.电子计数器计数法工作原理是测定小孔中液体电阻改变，小孔仅能经过一个细胞，当一个细胞经过这个小孔时，电阻显著增加，形成一个脉冲，自动统计在电子统计装置上。该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。所以，要求菌悬液中不含任何碎片。不适于微生物肥料产品检测。核酸计数法活菌计数法（培养法）平板计数法平板计数法示意图平板计数法（一）检测前准备培养基制备培养基定义指人工方法配合而成，专供微生物培养、分离、判别、研究和保留用混合营养物制品。培养基选择需要了解目标微生物基本特征，选择正确培养基培养基制备程序按《微生物肥料试验用培养基技术条件》要求执行，NY/T1114-培养基标识清楚，培养基名称，配制日期等。平板制备（二）操作过程2.1母液（基础液）制备2.2样品稀释、加样和涂布2.2.1系列稀释用无菌吸管分别吸收5.0mL上述母液菌悬液加至45mL无菌水（150mL三角瓶）中，按1:10(10倍)进行依次稀释，分别得到10-1，10-2，10-3，10-4等浓度菌悬液（每个稀释度应更换无菌吸管）注：稀释度：10-1，10-2，10-3，10-4，10-5相当于稀释倍数：101，102，103，104，1052.2.2加样和涂布稀释、加样和涂布注意事项2.3平板培养2.4菌落识别和计数（三）计算3.1有效稀释度选择计数标准以出现20~300个细菌菌落数稀释度平板为计数标准，丝状真菌为10~150个菌落数。当只有一个稀释度，其平均菌落数在20～300之间时，则以平均菌落数计算。若有两个稀释度，其平均菌落数均在20～300之间时，应按二者菌落总数之比值决定：若其比值小于等于2应计算二者平均数；若大于2则以稀释倍数小菌落平均数计算。例次3.2标准差平板上菌落数对应标准差要求标准差分析（例子）3.3有效活菌数和杂菌计算示例重复重复重复重复样品编号结果判定（示例）回顾关键点谢谢