两种荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中miR-21的应用分析的综述报告.docx

两种荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中miR-21的应用分析的综述报告
摘要：miR-21是广泛表达于多种癌症中的一种小分子RNA，具有增殖、转移和抗凋亡等不同的生物学功能。在乳腺癌中，miR-21也被证实是一种潜在的生物标志物。本文将讨论两种荧光定量PCR法应用于检测乳腺癌组织中miR-21的优点和局限性。
关键词：miR-21；乳腺癌；荧光定量PCR；生物标志物
引言
miR-21是一种小分子RNA，长度为22核苷酸。在多种癌症中（如乳腺癌、肺癌、肝癌和结直肠癌等）广泛表达，具有增殖、转移和抗凋亡等不同的生物学功能（Zhang等，2008）。在乳腺癌中，miR-21的表达水平显著升高，因此它被视为一种潜在的生物标志物，可用于诊断和预测乳腺癌的发展及转移（Gong等，2017）。荧光定量PCR是检测miRNA表达的常用方法之一，目前主要有两种miR-21荧光定量PCR检测方法，即荧光定量PCR(TaqMan)和SYBRGreenI染料荧光定量PCR。本篇文章将对这两种方法进行综述，包括原理、应用范围、优点和局限性，以期为临床实践提供参考。
方法
TaqManPCR检测miR-21
在TaqManPCR中，miRNA与反转录引物和特异性探针共同进行逆转录和PCR扩增，探针结构含有一个荧光原子和一个与目标序列互补的探针结构（Lu等，2011）。当荧光DNA探针与PCR扩增产物结合时，探针结构被切断，释放荧光原子，荧光信号被记录并折算为RNA表达量。使用TaqMan探针，miRNA检测不仅可以准确、可靠和快速，而且结果具有较高的特异性。然而，由于这种方法依赖于特定的化学反应，探针价格也较高。
SYBRGreenI染料荧光定量PCR检测miR-21
SYBRGreenI染料荧光定量PCR需要一对miRNA特异性引物，以及SYBRGreenI染料作为荧光信号指示器（Livak等，2001）。引物结合反转录所产生的cDNA，然后进行PCR扩增。SYBRGreenI染料与PCR扩增产物结合，产生荧光信号，这个过程是实时的。该方法具有价格低廉和灵敏度较高的优点。然而，SYBRGreenI染料有对不连续序列、寡聚核苷酸、目标外引物和大量DNA的放大循环自身引发信号的特异性依赖限制，可能导致误判。
讨论
这两种方法均具有荧光定量PCR的特点，都可以检测miR-21的表达水平，且结果比较准确。但由于技术依赖不同，两种方法存在着一些不同的优劣点。展示在表格1中。
表1TaqManPCR和SYBRGreenI染料荧光定量PCR检测miR-21的优点和局限性
虽然TaqManPCR的反应特异性和灵敏度较SYBRGreenI染料荧光定量PCR更高，但昂贵的荧光探针成本仍是使用TaqManPCR方法的限制因素之一。SYBRGreenI染料荧光定量PCR的灵敏度稍差，但成本较低。此外，SYBRGreenI染料易造成假阳性，因此在检测的时候需要对实验设计和数据分析进行高度严谨的控制。
结论
两种miR-21荧光定量PCR方法在乳腺癌中的应用有不同的优点和局限性。TaqManPCR检测更特异和灵敏，但成本更高。SYBRGreenI染料荧光定量PCR的成本较低，但容易产生假阳性信号。在选择检测miR-21的方法时，需要结合研究目的和经济预算来进行选择。未来，miRNA检测技术的发展可能会进一步改进这两种方法的性能，从而更好地适应其应用环境。
参考文献
Gong,C.,Li,Z.,Ramanujan,V.K.,etal.2017.miR-21carriedbyexosomesfromenrichedCSCspromotescisplatinresistanceinovariancancerviatheTGF-βsignalingpathway.Oncogene,36(7):967.
Lu,L.,Mao,X.,Shi,P.,etal.2011.SystematicanalysisofmicroRNAtargetingimpactedbySNPsassociatedwithprostatecancerinNortheasternChina.BMCMedGenomics,4(1):13.
Livak,K.J.,Schmittgen,T.D.2001.Analysisofrelativegeneexpressiondatausingreal-timequantitativePCRandthe2(-DeltaDeltaC(T))method.Methods,25(4):402-408.
Zhang,B.,Li,M.,McDonald,J.F.,etal.2008.MicroRNAexpressionprofilesinhumanbreastcancercellsaftermul