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黄曲霉毒素B1荧光定量检测试纸条性能评估测试

摘要：对上海飞测生物科技有限公司研发生产的黄曲霉毒素B1荧光定量检测试
纸条在粮食谷物饲料中的检测性能进行了评估。该产品的最低检出限（LOD）为
0.29μg/kg，最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg，线性范围为1.00-50.00μg/kg，线
性范围内的添加回收率为92.89%~121.07%，3次重复的变异系数在14.56%以内。
与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%。该产品具有操作简便、灵敏准确、快
速定量、重现性好等优点，适合用于对粮食谷物饲料中黄曲霉毒素B1的进行快
速定量测定。

关键词：黄曲霉毒素B1检测试纸条；荧光定量免疫层析；黄曲霉毒素B1；粮食
谷物饲料
黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含
有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素），具有强致癌性以及剧毒性，是迄
今发现的各种真菌毒素中最稳定的一种。从1993年开始黄曲霉毒素被认定为世
界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定的一类致癌物，是世界公认的三大强
致癌物质之一，而黄曲霉毒素B1由于毒性最大，污染最重，是危害最大的一种
黄曲霉毒素。

黄曲霉毒素B1污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，
且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。目前，GB2761-2011《食品安全国家
标准食品中真菌毒素限量》中对粮食谷物及其制品中黄曲霉毒素B1的最高限量
为20μg/kg。GB13078-2001《饲料卫生标准》中对不同种类的饲料中黄曲霉毒
素B1的最高限量标准从10-50μg/kg。

目前，国标法测定黄曲霉毒素B1采用HPLC法，需要大型的仪器设备，价格昂
贵，操作过程复杂、时间较长，且无法在现场和基础小型实验室使用。除此之外，
也有采用黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒或胶体金快速检测试纸条用于大量样品的
筛查，操作简便，检测快速，成本也较低，但准确性和重复性较差，容易造成假
阳性或者假阴性。因此，急需一种既简便快速，又能准确定量的检测方法，荧光
定量免疫层析正好可以满足这种需求。本文通过对多种粮食谷物饲料样品的实
测，验证了上海飞测生物开发的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测试纸条的技术
性能。

1实验材料和方法1.1试剂和材料
除注明外，均为分析纯，试验用水均为UP水。
黄曲霉毒素B1荧光荧光定量检测试纸条（由包被有荧光微球标记黄曲霉毒素B1
抗体的乳胶垫、喷涂有黄曲霉毒素B1抗原的检测线和喷涂有羊抗鸡二抗的控制
线的NC膜、样品垫及吸收垫组成）、样品提取液、样品稀释液、标准曲线ID
卡及标准曲线条形码均由上海飞测生物科技有限公司提供。

黄曲霉毒素B1及其他真菌毒素的标准品：购自Sigma公司；大米、玉米、小麦、
面粉等样品从超市购得或从企业取样。麸皮，小麦、面粉等饲料样品从饲料厂
和企业取样。
1.2仪器与设备FD-100型荧光免疫定量分析仪和FD-5000型试纸条恒温孵育器，
上海飞测生物科技有限公司提供；低速离心机，上海卢湘仪离心机仪器有限公司；
漩涡振荡器，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；电子天平：Sartorius；
1.3试验方法
1.3.1样品的前处理取具有代表性的待测样品500g，用小型粉碎机粉碎1min
后过20目筛，收集过筛的细小样品。称取1.0±0.02g过筛的样品于10mL离心
管中，加入5mL提取液，用漩涡混匀仪震荡5min(或者摇床振荡10min）后，
4000RPM离心1min，取上清。
1.3.2检测过程取50μL离心上清液加入500μL样品稀释液中，用漩涡混匀器
混匀3-5s，然后取100μL加入到黄曲霉毒素B1荧光定量检测试纸条的加样孔中，
置于37℃恒温孵育器中温育10min后，将试纸条插入荧光免疫定量分析仪中读
数，即为样品的实际检测浓度。当检测值大于50μg/kg时，可用提取液将离心
上清液稀释5倍后再进行检测，所得读数值乘以对应的稀释倍数即为最终的检验
结果。
2检测结果分析
2.1线性范围与检出限
在样品提取液中，分别添加1.00μg/kg、2.50μg/kg、5.00μg/kg、10.00μg/kg、
25.00μg/kg、50.00μg/kg的黄曲霉毒素B1标准品，用上海飞测生物黄曲霉毒
素B1荧光定量检测试纸条每个样品检测3次，以添加浓度为为纵坐标，以荧光
定量检测试纸条的检测结果为横坐标，拟合曲线并计算线性相关系数，结果如下：

图1黄曲霉毒素B1标准品添加与荧光定量试纸条检测值的线性关系

计算得出小麦的线性范围：1.00～50.00μg/kg（6点），回归方程:y=1.042x+
0.540,相关系数R²=0.998；（见图1）。取10个无污染（阴性）小麦样品、
10个无污染（阴性