动物细胞与组织培养技术.ppt

第三章动物细胞与组织培养技术第一节概述
分类：
细胞培养
组织培养
器官培养2、原代培养(PrimaryCulture)：亦称初代培养，指直接从机体取出的细胞或组织进行培养的过程。
3．继代培养（SecondaryCulture）：亦称传代培养，从原代培养的细胞继续转接培养称继代培养.
4、细胞系(cellline)：由原代细胞培养后经初步纯化，获得的以一种细胞为主、能在体外长期生存的不均一的细胞群体，一般为有限细胞系。

5、细胞株(cellstrain)：细胞系经过克隆或其他方法而得的单一类型的细胞群体。

细胞株、细胞系的命名：
􀁺以组织来源定名，如BHK(幼地鼠肾细胞)
􀁺以人名定名，如HeLa细胞
􀁺以时间地点来定名，如S7811细胞系
􀁺以临床疾病类型定名，如BALL-1细胞系(来自B淋巴细胞急性白血病人白细胞))
用于生产的动物细胞株二、动物细胞体外培养特点
动物细胞生长缓慢，培养时间长。
更易受微生物污染（包括细菌、真菌、病毒、支原体），需要防治污染问题。
对培养环境的适应性差，对环境极其敏感。包括PH值、温度、剪切力
对营养要求高，除了氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，一般还需要血清。
原代细胞一般繁殖50代左右退化死亡。
总之，动物细胞培养对各方面的要求更高，培养难度更大。
平滑肌细胞三、动物细胞培养的发展历史1913年，Steinhardt建立了单盖片悬滴培养法。
1925年，Maximow采用双盖片法。
1934年，Gey和Lewis用旋转管培养了许多细胞系。相继，人们设计了多种类型的培养瓶。
1948年，Sanford创立了单层细胞培养法，建立了各种细胞系。他还创建了单个细胞培养方法。
1951年，Pomerat设计了细胞培养灌流小室技术，使细胞生活在不断更新的培养液环境中，便于做细胞显微摄影和代谢等研究
1951年，厄尔（Earle）发明了体外培养动物细胞的人工合成培养基。

1952年．Gey建立了第一个人体细胞系，人体宫颈癌Hela细胞系。
1960年，Barski等人在两种不同类型的细胞混合培养物中发现有自发的融合细胞。
1962年，冈田善雄又发现了已灭活的仙台病毒可以诱发体内艾氏腹水瘤细胞和非恶性细胞融合。且融合细胞染色体丢失，恶性特征受到抑制。四、动物细胞的体外培养一般条件2、pH：最适为7.2～7.43、气体5、无菌
培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。当细胞放置于体外培养时，与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代谢物质积累等，可导致细胞死亡。因此在进行培养中，保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等，是维持细胞生存的基本条件。
（一）培养细胞的生长方式及类型贴壁依赖型细胞1、贴壁依赖型细胞
含义：一是细胞之间相互接触，二是细胞与细胞外基质结合。
单层附壁培养：指动物细胞培养中，大多细胞必须附着在固体表面生长，当细胞布满表面后即停止生长。在体外按照培养细胞的形态不同，主要可分为以下几类：成纤维细胞型、上皮型细胞、游走型细胞、多形型细胞
（1）成纤维细胞型：
本型细胞的形态似在体内生长的成纤维细胞；
长梭形，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞核位于中央，胞质向外伸出2-3个长短不同的突起，生长时呈放射状、漩涡状走向，细胞间间隙较大。
其生长特点为细胞一般并不紧靠相连；
中胚层细胞体外培养时一般表现为这一形式。如人胚肺细胞。
人的成纤维细胞大鼠血管平滑肌细胞（2）上皮型细胞
此类型细胞在培养器皿支持物上生长具有扁平状，不规则。
细胞贴壁后呈不规则多角形，中央有扁圆形核，细胞彼此紧密相连成单层细胞，呈现“铺路石状”。
生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。
内胚层和外胚层细胞体外培养时都可能呈现上皮型。如皮肤、消化道、呼吸道、肺泡、消化腺上皮细胞，血管内皮细胞等。
Hela细胞呈现为典型的上皮细胞型。单层扁平上皮细胞成骨肉瘤细胞(多角形)奶牛肾脏上皮细胞(上皮细胞型)（3）游走型细胞：单核巨噬细胞单核巨噬细胞（未刺激状态）单核巨噬细胞（活化剂刺激6h后）：向四周伸展伪足需要注意的是：在实际细胞培养中，可能同时存在2种及其以上细胞形态；其影响因素包括（1）不同来源细胞细胞形态学表现不同；（2）不同培养条件下同一细胞表现不同形态；如血清成分，培养基，温气环境等神经细胞（DAB显色）大鼠海马神经细胞2非贴附型细胞
悬浮型细胞：指细胞在体外培养时不必贴壁，可在培养液中悬浮生长。
见于少数特殊的细胞，如血液白细胞、淋巴组织细胞、杂交瘤细胞转化细胞系、某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。
这种细胞的形态特点：胞体始终为球形。
优点：生存空间大，培养效率高，利于大量生产，与培养基充分接触无需消化传代，