体内药物分析.pptx

生物样品特点样品制备：去除蛋白质、缀合物水解、化学衍生化、分离浓集（液液萃取、固相萃取等）；样品测定：光谱分析法、色谱分析法、免疫分析法、生物学方法方法验证：特异性、标准曲线和定量范围、定量下限、精密度与准确度、稳定性、提取回收率第一节、惯用体内样品制备与贮藏血浆制备：采集静脉血液置含有抗凝剂试管中，混合后，以25003000r/min离心510min使与血球分离，所得淡黄色上清液即为血浆。抗凝剂—最惯用是肝素（heparin），肝素是体内正常成份，所以不会改变血样化学组成或引发药品改变，普通不会干扰药品测定。通常1ml血液需用肝素0.10.2mg或20IU(1mg126IU)。可无须准确控制其它抗凝剂EDTA、枸橼酸盐、草酸盐等，是与血液中钙离子结合试剂，它们可能引发被测组分发生改变或干扰一些药品测定，不常使用。血清制备：采集静脉血液置试管中，于37℃或室温放置30min1h。血液凝固后，用细竹棒或玻璃棒轻轻剥去试管壁上血饼，再在25003000r/min离心510min，上层淡黄色液体即为血清。现文件所指血药浓度为血浆或血清中药品总浓度（游离和血浆蛋白结合总浓度）。血浆与血清区分（二）尿样：尿样测定主要用于药品剂量回收研究、药品肾去除率和生物利用度等研究，以及测定代谢物类型等。体内药品去除主要是经过尿液排出，药品能够原型（母体药品）或代谢物及其缀合物形式排出。尿样常需加入防腐剂。成人一日排尿量为15L。尿样包含随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿及时间尿几个。因尿液浓度改变较大，所以应测定一定时间内排入尿中药品总量。普通采集时间尿（要求时间内采集尿液体积和排入尿中药品总量）。尿液中药品浓度改变不能直接反应血药浓度，即与血药浓度相关性较差、尿液量较大不易保留等。（三）、唾液：唾液中药品浓度通常与血浆浓度相关。样品易得，取样无损害，尤易为儿童接收。有些可从药品唾液浓度推定血浆中游离药品浓度。唾液由腮腺、颌下腺和舌下腺三个主要唾液腺分泌聚集而成前二者分泌量占总量90%。二者中浓度大致相当。取样：在潄口后15min，平静状态下采集口腔内然流出唾液；也可在刺激下快速采样(需注意干扰)。如口嚼石腊片或将柠檬酸、维生素C等置于舌尖，弃去初始部分后采集。刺激后采集为混合唾液。药品在脏器组织中分布情况，惯用胃、肝、肾、肺、心等。制备：测定之前普通需制成匀浆组织样品处理：沉淀蛋白法、酸水解法、酶水解法（蛋白水解酶）（五）头发：头发样品采集：采集枕部发样(带根部），微量元素在前额部位头发中含量最低，枕部含量最高。头发样品洗涤：除去外源性污染物，推荐使用丙酮-水-丙酮；丙酮浸泡搅拌10min，自来水漂洗3次，再用丙酮浸泡搅拌，自来水、蒸馏水各洗3次。头发样品处理：直接甲醇提取、酸水解、碱水解、酶水解（葡萄糖醛酸酶）三、体内样品贮存与处理分析方法与样品处理步骤选择一、体内样品预处理目标1、使药品从缀合物及结合物中释放出来，以测定药品总浓度。2、介质复杂，干扰物多，待测物浓度低，须分离干扰物质、富集待测药毒物3、为了适应和符合测定方法所要求灵敏度4、为了预防分析仪器污染、劣化，提升检测准确度、精密度和选择性等。二、惯用体内样品预处理方法要考虑：药品理化性质（极性、酸碱性、光谱特征、挥发性、稳定性），药品测定目标，选取生物体液和组织类型，待测物浓度范围，样品制备与分析技术关系。（一）、去除蛋白质2、加入中性盐使蛋白脱水而沉淀，硫酸铵最惯用3、加入强酸与蛋白形成沉淀，阴离子型沉淀剂。如三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸等，在酸性下分解药品不宜用本法去蛋白。4、热凝固法加热至90℃蛋白热变性后离心或过滤除去体内药物分析（二）分离、纯化与浓集当药品浓度较低或分析方法特异性或灵敏度不够高时，生物样品需分离、纯化与浓集。1、液相萃取法22提取溶剂：极性相同相溶溶剂用量：普通有机相与水相之比为1：1~5：1溶液pH调整：最正确pH选择主要与药品pKa值相关。酸性药品pH应低于药品pKa值1~2个单位；碱性药品：pH应高于药品pKa值1~2个单位。提取：进行一次（至多二次）提取，浓集：惯用吹氮气使溶剂挥散，或减压蒸发（注意暴沸）。生物样品宜在碱性或近中性提取，生物基质中内源性物质多为酸性，在碱性下不易被萃取出来。液液萃取特点：优点：可将大部分内源性杂质去除；经济实用、可使样品富集、可一次进行多个样品萃取缺点：乳化、污染环境、乳化去除：加少许固体氯化钠到水相中可减轻乳化；轻微乳化离心；严重乳化低温冰箱快速冷冻破坏乳化层后融化离心。2、固相萃取法：27固相萃取模式及原理试验步骤30柱切换高效液相色谱技术是指由阀来改变流动相走向与流动相系统，从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入分析柱技术。用两个或两个以上柱子连接组成色谱网络系统，使不一样柱子到达不一样分离目标，柱子间用