实验鸡胚接种专家讲座.pptx

二、试验目标了解鸡胚基本结构与功效，掌握惯用鸡胚接种方法。三、鸡胚结构与功效卵壳壳膜气室绒毛尿囊膜尿囊腔羊膜与羊膜腔卵黄卵白四、材料1、鸡胚10日龄2、病毒鸡新城疫病毒（NDV）3、照蛋灯4、打孔器5、石蜡6、注射器7、蛋座8、酒精棉球、碘酊棉球五、受精卵选择六、孵育七、检卵八、接种前处理九、鸡胚用于病毒培养优缺点（一）优点（二）缺点十、接种路径1、尿囊腔接种2、绒毛尿囊膜接种3、卵黄囊接种4、眼球接种5、羊膜腔接种正粘病毒和副粘病毒6、脑内接种狂犬病毒7、静脉接种蓝舌病毒（一）卵黄囊接种法主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次氏体等分离和增殖。方法一：1）取6-8日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和胚胎位置后，垂直放置在卵座上(大头向上)4）用注射器吸收病毒悬液，沿气室端所穿小孔垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。5）用熔化石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，天天翻卵1-2次，24h内死亡者废弃。4）用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm，注入病毒液0.1-0.5ml5）用熔化石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，24h内死亡者废弃（二）绒毛尿囊膜接种主要用于痘病毒和疱疹病毒分离和增殖。方法一：1）取10-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒2）在气室端卵壳上开一1.5×1.5cm口3）用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜4）滴入接种物5）用胶布或透明胶纸封闭切口方法二：（要做人工气室）1、在胚胎附近近气室处，选择血管较少部位，用电烙器在卵壳上烙一个直径约3-4mm烤焦圈。5、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造成气室内负压，使卵窗部位绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上生理盐水快速渗透。6、用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。7、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中，周围涂上熔化石蜡密封，气室中央小孔用石蜡密封。8、胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。（三）尿囊腔接种主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感病毒、新城疫病毒分离和增殖。1、选取10-11日龄鸡胚，画出气室和胚位2、在气室靠近胚体处用碘酊和酒精进行消毒3、用钢锥穿一小孔4、将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入0.1-0.2ml接种物5、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，天天翻卵并检卵一次，24h内死亡者废弃。十一、NDV接种鸡胚后对鸡胚影响NDV以尿囊腔接种于9-10日龄鸡胚，强毒株在30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。死亡鸡胚以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、足趾、翅膀出血尤为显著。十二、收毒收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上，冻死胚胎，预防出血。依据接种路径不一样，收获对应材料1、绒毛尿囊膜接种收获接种部位绒毛尿囊膜2、尿囊腔接种收获尿囊液（5-8ml）3、卵黄囊接种收获卵黄囊或胚体4、羊膜腔接种收获羊水（0.5-1ml）