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基因工程基本操作程序一、目的基因的获取编码区编码区外显子：真核细胞基因DNA中的编码序列，这些序列被转录成RNA并进而翻译为蛋白质。内含子：真核细胞基因DNA中的间插序列，这些序列被转录成RNA，但随即被剪除而不翻译。2.目的基因的概念3.目的基因的获取的方法（1）从基因库中获取目的基因部分基因文库的建立方法cDNA合成过程②基因组文库和cDNA文库的主要区别（2）应用PCR技术扩增目的基因D、人工合成目的基因不用限制性内切酶科学家在培育抗虫棉时，起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。真核细胞的编码区是间隔的，不连续的。（1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了(3)用化学方法直接人工合成目的基因含有氨苄青霉素的完全培养基基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段）Hind限制性酶ⅠⅡDNA分子杂交（northern杂交）科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入抗虫基因终止子，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。TACACGTGCATCAAT外显子：真核细胞基因DNA中的编码序列，这些序列被转录成RNA并进而翻译为蛋白质。怎样从基因文库中找到我们所需要的目的基因以哺乳动物基因组DNA为例，介绍Southern印迹杂交的基本步骤以哺乳动物基因组DNA为例，介绍Southern印迹杂交的基本步骤以哺乳动物基因组DNA为例，介绍Southern印迹杂交的基本步骤(3)用化学方法直接人工合成目的基因1.作用：质粒寻根问底：资料:①②③⑤B.鉴定——个体生物学水平的鉴定①基因文库和部分基因文库的慨念：（2）将目的基因导入动物细胞基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段）（1）DNA分子与DNA分子的之间杂交（二）DNA限制酶消化将生物的所有DNA直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？复性或退火（55～60OC)：科学家在培育抗虫棉时，起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。四、放射性自显影检测若通过基因过程生产人的糖蛋白可以用大肠杆菌作为工程菌吗？（2）真核与原核生物基因结构的比较将基因文库中的所有菌落裂解，用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白质和RNA（如量不够可用PCR扩增）个体生物学水平的鉴定：真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。Hind限制性酶ⅠⅡ①特点:Hind限制性酶ⅠⅡ花粉管通道法：基因枪法：③常用法：例：若通过基因过程生产人的糖蛋白可以用大肠杆菌作为工程菌吗？四目的基因的检测与鉴定——检查是否成功1.检测变性例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。1、有关基因工程的叙述中，错误的是()A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B、限制性内切酶用于目的基因的获得C、目的基因须由运载体导入受体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶2、下列属于获取目的基因的方法的是()①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④利用PCR技术⑤利用DNA转录⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥3、有关基因工程的叙述正确的是（）A、限制酶只在获得目的基因时才用B、重组质粒的形成在细胞内完成C、质粒都可作为运载体D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达1A2D3D4C脱分化存活的大肠杆菌感谢观看