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电泳槽液颜料絮凝的补救办法及对策
导言:
电泳技术是一种有效的分离生物大分子的方法,尤其在蛋白质和核酸的形态调查方面得到广泛应用。但是在实际操作中,减少电泳实验中的颜料絮凝是一个重要的问题。颜料絮凝会影响样品的稀释,导致电泳质量下降,甚至影响实验结果的准确性。因此,在电泳实验中,应该采取一些有效的措施来减少颜料絮凝。本文将探讨导致颜料絮凝的原因,以及采取的补救措施与对策。
1.颜料絮凝的原因
1.1.pH值不当
电泳缓冲液的pH值对实验结果产生重要影响。低pH值可能导致造成蛋白质或核酸破坏,高pH值则可能导致DNA鹰嘴凝固或电泳缓冲液的分解。通常,pH值在8.0~8.5的条件下,电泳实验最为稳定。
1.2.电泳缓冲液中离子浓度不合适
电泳缓冲液中离子浓度对实验结果影响也很大。离子浓度太低可能导致电子流动不良,离子浓度过高则可能造成样品损失,且对pH值的稳定性有影响。在实验中,通常建议Na+浓度在100-200mM以内,而Cl-浓度在100-150mM。
1.3.样品准备不当
样品的纯度会影响电泳效果,并可能造成絮凝。对于蛋白质样品,在还原前最好将其进行沉淀,萃取,以及干燥等处理。样品完全还原后,最好将其快速冷却(0度)即可避免因样品清洁度不足导致的问题,减少分子结构变化的可能性。
1.4.细胞碎片污染
在细胞溶解液的制备过程中,可能误零星留下一些细胞碎片,牛血清碎片等。这些碎片在电泳过程中非常容易造成絮凝,也会影响电泳结果的准确性。
2.采取的补救措施与对策
2.1优化电泳条件
优化电泳条件是解决絮凝问题的基本措施。例如:在选择电泳缓冲液浓度时,可以采用更弱的缓冲液,并在电泳过程中较长时间不停止运行,使样品分散更加均匀。同时,调整电压大小和实验温度,也是减少絮凝的重要措施,可以使电泳分离物分散更加均匀,从而避免结合了静电效应形成的团块。
2.2变更电泳缓冲液
如果电泳实验仍然发生了颜料絮凝,可以采用不同的电泳缓冲液配方。例如,使用Tris-Bicine缓冲液代替Tris-Acetate缓冲液可能会减少絮凝的问题。
2.3增加短暂超声波
在实验的初期,若出现颜料絮凝的情况,可以尝试增加短暂超声波,以分散絮凝物并减少颜料絮凝。
2.4采用色谱法纯化样品
色谱法可以去除离子和杂质,提高样品纯度,从而减少颜料絮凝的可能。但是,从样品洗涤缓慢和对部分蛋白的影响等方面考虑,色谱法纯化并不适用于所有情况。
结论:
因此,在电泳实验中,减少颜料絮凝是很重要的。通过优化电泳条件和采取其他补救措施,可以有效减少颜料絮凝,确保实验结果的准确性。当然对于不同的电泳实验,也要根据具体情况进行处理。
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