2023118248941肝细胞源PCSK9外泌体的制备方法.pdf

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN117467598B
(45)授权公告日2024.05.10
(21)申请号202311824894.1戴薇薇等《.医学科研型研究生常用实验技
(22)申请日2023.12.28术与方法》.上海科学技术出版社,2021,第223-
224页“（五）免疫磁珠法”.
(65)同一申请的已公布的文献号
孟昶.低氧训练对肥胖大鼠肝脏脂代谢关联
申请公布号CN117467598A
基因及血清外泌体的影响《.中国优秀硕士学位
(43)申请公布日2024.01.30论文全文数据库》.2021,(第02期),第11-12页
“2.1.3”、“2.1.4
(73)专利权人健颐生物科技发展（山东）有限公建立营养型肥胖大鼠模型实
”30-31“4.1.1
司验分组和干预方案，第页实验大
”、“4.1.3”31-35
地址250021山东省济南市槐荫区经七路鼠取材血清外泌体的提取，第
“4.1.4”、“4.1.5
586号新泉城大厦A座8楼814-816页血清外泌体的鉴定血清外
泌体蛋白质组学实验”，第53-55页“4.3.2训练
(72)发明人
蒋永强王清路对外泌体的影响”第3段.
(74)专利代理机构淄博启智达知识产权代理事田雪文等.低氧训练对肥胖大鼠血清外泌体
务所(特殊普通合伙)37280的影响《.第十二届全国体育科学大会》.2022,全
专利代理师任永哲文.
(51)Int.Cl.RezaAfrisham等.Anti-Inflammatory
C12N5/071(2010.01)EffectsofPlasmaCirculatingExosomes
A01K15/02(2006.01)ObtainedfromNormal-WeightandObese
SubjectsonHepatocytes《.Endocrine,
(56)对比文件Metabolic&ImmuneDisorders-Drug
CN106880646A,2017.06.23
Targets》.2020,第20卷(第00期),全文.
CN116622639A,2023.08.22
CN114657136A,2022.06.24审查员王竞依
WO2022071601A1,2022.04.07权利要求书1页说明书7页附图7页
(54)发明名称
肝细胞源PCSK9外泌体的制备方法
(57)摘要
本发明属于动物细胞技术领域，具体涉及一
种肝细胞源PCSK9外泌体的制备方法。雌性SD大
鼠通过喂食高脂饲料，得到营养肥胖型大鼠；在
低氧环境中，营养肥胖型大鼠进行跑台训练，得
到低氧训练肥胖大鼠；其中，低氧环境中的氧浓
度为13‑14%，跑台训练是先进行适应性跑台训练
再进行中等强度跑台训练；分离低氧训练肥胖大
鼠的外周血血清，外周血血清分离得到肝细胞源
PCSK9外泌体。本发明获得的外泌体可以调控脂
肪组织免疫微环境，消除脂肪组织炎症，为进一
步脂肪组织代谢类疾病的药物开发或预防措施
CN117467598B
提供帮助。
CN117467598B权利要求书1/1页

1.一种肝细胞源PCSK9外泌体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）营养肥胖型大鼠模型的构建
雌性SD大鼠通过喂食高脂饲料，得到营养肥胖型大鼠；
（2）低氧训练肥胖大鼠模型的构建
在低氧环境中，营养肥胖型大鼠进行跑台训练，得到低氧训练肥胖大鼠；其中，低氧环
境中的氧浓度为13.6%，跑台训练是先进行适应性跑台训练再进行中等强度跑台训练；
适应性跑台训练的条件是跑台速度从11m/min递增到20m/min，训练时间从20min/d
递增到60min/d；
中等强度跑台训练的条件是跑台速度为20m/min，训练时间为每天1小时，每周5天；
（3）PCSK9外泌体的获得
分离低氧训练肥胖大鼠的外周血血清，外周血血清分离得到肝细胞源PCSK9外泌体；
步骤（3）中外周血血清分离的方法是外周血血清通过离心分离得到总外泌体，然后采
用PCSK9抗体包被的磁珠分离得到肝细胞源PCSK9外泌体；
步骤（2）中适应性跑台训练的条件如下：

；

步骤（2）中中等强度跑台训练的时间为4周；
步骤（2）中中等强度跑台训练在每天17时开始。
2.根据权利要求1所述的肝细胞源PCSK9外泌体的制备方法，其特征在于步骤（3）中分
离低氧训练肥胖大鼠的外周血清的方法是低氧训练肥胖大鼠麻醉后腹主动脉取血，离心，
即得。

2
CN117467598B说明书1/7页

肝细胞源PCSK9外泌体的制备方法

技术领域
[0001]本发明属于动物细胞技术领域，具体涉及一种肝细胞源PCSK9外泌体的制备方法。

背景技术
[0002]目前超重和肥胖持续攀升成为全球性问题，肥胖容易导致高