




如果您无法下载资料,请参考说明:
1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币
2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费
3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号CN108220418A (43)申请公布日2018.06.29 (21)申请号201711470762.8 (22)申请日2017.12.29 (71)申请人东莞博奥木华基因科技有限公司 地址523808广东省东莞市松山湖高新技 术产业开发区桃园路1号莞台生物技 术合作育成中心11栋 (72)发明人糜庆丰周幸芝吕来灰吴春求 朱鹏远黄铨飞王杨陈雨 刘丽菲 (51)Int.Cl. C12Q1/6883(2018.01) C12Q1/686(2018.01) C12N15/11(2006.01) 权利要求书1页说明书15页 序列表47页附图2页 (54)发明名称 基于多重PCR捕获技术的杜氏/贝氏肌营养 不良症的检测试剂盒及方法 (57)摘要 本发明公开了一种DMD基因多重PCR捕获引 物组、DMD基因突变检测试剂盒及DMD基因突变检 测方法。发明人针对DMD基因的79个外显子和两 侧50bp内含子序列以及23个已知内含子致病突 变提供了一种多重PCR捕获引物,并且基于引物 组提供了一种DMD基因突变检测方法,其检测灵 敏度高,准确性好,扩增效率高度一致,对DNA样 本质量要求低,解决了现有技术难以采用多重 PCR捕获技术一次性进行完整的DMD基因突变信 息检测,特别是对于杂合性缺失/重复。 CN108220418A CN108220418A权利要求书1/1页 1.DMD基因多重PCR捕获引物组,所述引物组含有核苷酸序列如SEQIDNO:1~SEQID NO:290所示的引物序列。 2.根据权利要求1所述的DMD基因多重PCR捕获引物组,其特征在于:所述引物组还含有 捕获内参基因的引物序列。 3.根据权利要求1或2所述的DMD基因多重PCR捕获引物组,其特征在于:所述引物序列 5’端还连接有测序平台建库所需的序列。 4.根据权利要求2所述的DMD基因多重PCR捕获引物组,其特征在于:内参基因选自 GAPDH基因、β-actin基因、18s-rRNA基因。 5.DMD基因突变检测试剂盒,包括权利要求1~4任一项所述的DMD基因多重PCR捕获引 物组。 6.DMD基因突变检测方法,包括:根据测序平台建库需求,利用权利要求1~4任一项所 述的引物组构建扩增子文库,经文库质控、高通量测序和生物信息分析,获得DMD基因的突 变信息,所述突变信息包括纯合性/杂合性的缺失/重复、点突变和未知突变。 7.根据权利要求6所述的DMD基因突变检测方法,其特征在于:所述方法进一步包括步 骤: (1)在权利要求1或2所述的引物序列5’端连接上通用序列作为引物组,用于捕获模板 DNA的目标区域,获得多重PCR产物,对多重PCR产物进行纯化; (2)利用P1接头、标签接头与多重PCR纯化产物进行第二次PCR扩增,对不同样品的第二 次扩增产物进行混合和纯化,获得扩增子文库,; (3)扩增子文库质控、proton测序,对下机数据进行生物信息学分析。 8.根据权利要求7所述的DMD基因突变检测方法,其特征在于:引物混合比例按表1的引 物pooling系数所示。 9.根据权利要求7所述的DMD基因突变检测方法,其特征在于: 任选地,步骤(1)中,10μL多重PCR的反应体系为:2X多重PCR缓冲液5μL、10Xprimer pool(100uM)0.5μL、Nuclease-freeWater(4.5-Y)μL、gDNA(10ng)YμL;PCR反应程序:95℃3 ~5min;12~15cycles(95℃30~45s,62℃1~3min,72℃30~45s),72℃1~2min,8~16℃ Hold; 任选地,步骤(2)中,25μL的第二次PCR扩增体系:2X建库PCR缓冲液12.5μL、标签接头 0.5μL、P1接头0.5μL、多重PCR纯化产物11.5μL;PCR反应程序:98℃3~5min;23~26cycles (98℃10~20s,60℃30s~2min,72℃20~40s),72℃1~2min,8~16℃Hold。 10.根据权利要求7所述的DMD基因突变检测方法,其特征在于: 所述通用序列的核苷酸序列为:5’-AAATGGGCGGTAGGCTTG-3’; 所述P1接头:5’-CCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT-通用序列-3'; 标签接头:5’-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAGNNNNNNNNGAT-通用序列-3’;序列中N 表示AGCT任意碱基,NNNNNNNN用于识别不同样品构建的文库。 2 CN108220418A说明书1/15页 基于多重PCR捕获技术的杜氏/贝氏肌营养不良症的检测试剂 盒及方法 技术领域
Ta的资源

2020110359336低致栓颅内血管编织支架及其处理方法

2020110303186一种钙钛矿量子点聚合物粒子的制备方法

2020110124078基于精准医疗的大数据分析系统及方法

2020109651910 应用近红外谷物分析仪建立油莎豆中粗脂肪含量的检测方法

2020109529321一种铝合金用无氟无氯环保粒状精炼剂及其制备和应用

2020108899336一种新能源商用车总装车间线路布局

2020108620703城市燃气管网多输差协同计算模型及应用方法

2020108207369一种微交联阳离子型聚丙烯酰胺絮凝剂及其制备方法与应用

2020108035131一种基于全站仪的激光雷达外部参数标定方法

2020107682859一种内燃机等离子节油器阴阳极的制备方法

13****40
实名认证
内容提供者


最近下载