CN2018112331963一种高效的小鼠骨髓来源巨噬细胞的转染方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN111057719A
(43)申请公布日2020.04.24
(21)申请号201811233196.3
(22)申请日2018.10.17
(71)申请人南京大学
地址210046江苏省南京市栖霞区仙林大
道163号生命科学院B209
(72)发明人沈萍萍章文龙唐嘉荩黄亚红
(51)Int.Cl.
C12N15/867(2006.01)

权利要求书1页说明书4页附图2页
(54)发明名称
一种高效的小鼠骨髓来源巨噬细胞的转染
方法及其应用
(57)摘要
本发明为一种高效的小鼠骨髓来源巨噬细
胞的转染方法及其应用，其包括以下步骤：1)首
先将293T细胞传代至60mm*15mm皿中，培养过夜，
使其密度达到80％，按照目的质粒/psPAX2/
pMD2.G的顺序以6/3/1的比例进行慢病毒的包
装，以获得高滴度慢病毒，滴度为2～3×107TU/
mL(总体积5mL)；2)取小鼠骨髓，加入鼠源M-CSF
(10ng/mL)进行巨噬细胞诱导，在诱导的第二天
加入慢病毒，可以获得高转染效率。本发明在巨
噬细胞诱导过程中加入慢病毒，不但能够提高了
慢病毒的转染效率，同时还能在不影响巨噬细胞
得率的情况下，缩短实验时间。
CN111057719A
CN111057719A权利要求书1/1页

1.一种慢病毒介导的小鼠骨髓来源巨噬细胞的高效转染方法，所述方法包括以下步
骤：
1)按照目的质粒/psPAX2/pMD2.G的顺序以6∶3∶1的比例在293T细胞中进行慢病毒的包
装，获得高滴度慢病毒；
2)取小鼠骨髓细胞，加入鼠源M-CSF(10ng/mL)进行诱导，在诱导的第二天加入慢病毒，
持续诱导培养7天，获得高转染巨噬细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于目的质粒/psPAX2/pMD2.G比例为6∶3∶1。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于病毒滴度为2～3×107TU/mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包装病毒所用的细胞是293T细胞。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于该转染方法所针对的细胞是小鼠骨髓来源
的巨噬细胞。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在小鼠骨髓细胞诱导成巨噬细胞的第二天
加入慢病毒。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于加入病毒后，不进行换液，继续诱导培养至
第7天，贴壁细胞为巨噬细胞。

2
CN111057719A说明书1/4页

一种高效的小鼠骨髓来源巨噬细胞的转染方法及其应用

技术领域：
[0001]本发明涉及生物技术领域，具体为一种高效的小鼠骨髓来源巨噬细胞的转染方法
及其应用。

背景技术：
[0002]转染是分子生物学和细胞生物学领域的重要实验技术，是将外来遗传物质转移到
真核细胞中的专门技术。随着基因和蛋白质功能研究的深入，转染已成为现代分子生物学
研究中常见的基本方法，将外源遗传物质引入细胞为细胞水平的基因功能研究奠定了基
础。随着近年来基因工程技术的不断发展，出现了多种多样的转染技术，按外源遗传物质是
否与基因组整合来分，转染技术为稳定转染和瞬时转染两大类；按转染实施手段来分，转染
技术分为物理介导、化学介导和生物介导三大类。
[0003]物理介导的方法中比较常用的是电穿孔法，但细胞敏感性较高，且对细胞活力影
响较大。目前实验室最常用的是化学介导方法，以脂质体转染法最为普遍，商品化脂质体转
染试剂易于使用和购买，对于293T等容易转染的细胞，转染效率较高且毒性较低，但对于原
代细胞及其他难转细胞，脂质体技术的转染效率较低，无法满足实验要求，限制了该方法的
使用。生物介导的方法常用的是慢病毒转染技术和腺病毒转染技术，适用于较难转细胞如
原代细胞，但制备过程较为复杂，且影响转染效率因素较多。针对不同模型，使用不同的转
染方法，转染技术的不同影响着转染效率，从而影响到整个实验结果。因此在进行细胞转染
前，需对转染方法及需转染的细胞等因素进行综合分析，筛选出转染的最适方法和条件，已
达到最高转染效率，满足实验要求。
[0004]慢病毒载体是以人类免疫缺陷I型病毒(HIV-1)为基础发展起来的病毒载体，包含
了病毒包装、基因转染、稳定整合基因组所需要的遗传信息，是慢病毒系统的主要组成部
分。慢病毒载体可以感染处于有丝分裂活跃期的细胞，也可以感染分裂缓慢及处于分裂终
末期的细胞，包括神经干细胞、造血干细胞、肝实质细胞和处于分化终末的神经元等。在体
外培养细胞实验和体内基因治疗实验中，由慢病毒载体携带需转入的目的基因以得到可以
长期而稳定的表达。此外，经过改建后的慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白，免疫原性低，可
以容纳约10kb左右的外源基因，因此大多数基因