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(19)国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号CN111965366B (45)授权公告日2022.11.29 (21)申请号202010654390.XG01N33/558(2006.01) (22)申请日2020.07.09G01N33/543(2006.01) (65)同一申请的已公布的文献号审查员周洋 申请公布号CN111965366A (43)申请公布日2020.11.20 (73)专利权人何凤屏 地址512026广东省韶关市武江区沿江路8 号G-1栋301号 专利权人刘布 (72)发明人何凤屏刘布 (74)专利代理机构广州三环专利商标代理有限 公司44202 专利代理师郝传鑫周全英 (51)Int.Cl. G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页 (54)发明名称 一种唾液快速检测外泌体肌钙蛋白的方法 及试剂盒 (57)摘要 本发明提供了一种唾液快速检测外泌体肌 钙蛋白的免疫层析检测试纸,包括样品垫区、抗 体区、微流控纸芯片区、金标垫区、硝酸纤维素膜 区、吸水垫区,各个区域依次连接。本发明的免疫 层析检测试纸可以快速的检测出唾液外泌中的 肌钙蛋白,不依赖于仪器和设备,即可通过检测 试纸判定是否患有急性心肌梗死。本发明的试纸 在诊断同时还能对人群中肌钙蛋白的含量15mg/ mL,50mg/mL,100mg/mL做出区分,能够准确判断 出高危人群。本发明不仅缩短了检测时间,还提 高检测的精准度,实现了移动检测和家庭自助式 检测。 CN111965366B CN111965366B权利要求书1/1页 1.一种唾液快速检测外泌体肌钙蛋白的免疫层析检测试纸,其特征在于,包括样品垫 区、抗体区、微流控纸芯片区、金标垫区、硝酸纤维素膜区、吸水垫区,其中: 样品垫区:用于滴加唾液或浸泡唾液;唾液样品经过唾液样品前处理液去除了唾液中 的高丰度蛋白和黏蛋白;所述唾液样品前处理液的制备方法为将0.2422g的0.01~0.2mol/ LTris溶于100ml蒸馏水中,加入0.149g的0.4%EDTA和0.16g的SDS,再加入交联聚乙烯吡 咯烷酮10~100mg,1%~5%BSA,加入HCl调节pH值为7.0~8.0; 抗体区:所述抗体区上包被半乳糖凝聚素3抗体,用于第一步富集和分离唾液外泌体, 所述包被半乳糖凝聚素3抗体区与所述样品垫区连接; 芯片区:所述芯片区上设有微流控纸芯片,用于进一步分离纯化并得到尺寸小于200‑ 250nm的唾液外泌体,所述微流控纸芯片区与包被半乳糖凝聚素3抗体区连接; 金标垫区:所述金标垫区上设有被胶体金颗粒标记的肌钙蛋白抗体,被胶体金颗粒标 记的肌钙蛋白抗体与唾液中外泌体上的肌钙蛋白抗原结合,所述金标垫区与所述微流控纸 芯片区连接; 硝酸纤维素膜区:所述硝酸纤维素膜区上设有检测T线和质控C线,多组T线用于检测唾 液中外泌体上的肌钙蛋白含量,C线作为控制线;所述硝酸纤维素膜粘贴区与所述金标垫区 连接; 所述微流控纸芯片上设有亲/疏水微细通道网络,并与层析纸相连接;在微流控纸芯片 中间设计直径为200‑250nm的圆孔,用于提取和纯化外泌体,分离大于200‑250nm的蛋白及 杂质,硝基纤维滤膜作为纸芯片的基底; 所述T线有三组T线(71,72,73)检测唾液中外泌体上的肌钙蛋白含量为15~100mg/ml。 2.如权利要求1所述的免疫层析检测试纸,其特征在于,所述的微流控纸芯片使用高分 子聚合物材料:包括聚二甲基硅氧烷、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、滤纸。 3.如权利要求1所述的免疫层析检测试纸,其特征在于,所述T线的划线抗体为肌钙蛋 白单克隆抗体;所述C线的划线抗体为羊抗鼠IgG。 4.如权利要求1所述的免疫层析检测试纸,其特征在于,所述T线(71)上测唾液中外泌 体上的肌钙蛋白含量为15mg/mL;所述T线(72)上测唾液中外泌体上的肌钙蛋白含量为 50mg/mL;所述T线(73)上测唾液中外泌体上的肌钙蛋白含量为100mg/mL。 2 CN111965366B说明书1/6页 一种唾液快速检测外泌体肌钙蛋白的方法及试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及生物检测技术领域,尤其涉及一种唾液快速检测外泌体肌钙蛋白的方 法及试剂盒。 背景技术 [0002]心血管疾病(CVD)是全球健康的“第一杀手”,心血管疾病每年导致30%(2008年为 1730万人)的死亡,预计到2030年将进一步增加,达到2330万人。心血管疾病80%为冠状动 脉粥样硬化性心脏病(冠心病),而急性心肌梗死是冠心病中的最严重的一种。急性心肌梗 死,(acutemyocardialinfarction,AMI)是冠状动脉出现急性阻塞,心脏持续性缺血缺氧 所引起的心肌坏死,使得心脏
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