2017103813271一种增强基因表达的自激活Gal4UAS系统表达盒的建立.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN107760707B
(45)授权公告日2020.05.19
(21)申请号201710381327.1CN106399368A,2017.02.15,
(22)申请日2017.05.25CN101012282A,2007.08.08,
CN106755050A,2017.05.31,
(65)同一申请的已公布的文献号WO02101011A2,2002.12.19,
申请公布号CN107760707ACN106676132A,2017.05.17,
(43)申请公布日2018.03.06CN103695375A,2014.04.02,
(73)专利权人西北农林科技大学李春峰等.GAL4/PUAS系统在转基因技术中
地址712100陕西省西安市杨凌示范区邰的应用研究进展《.生物技术》.2006,第16卷(第1
城路3号期),第78-81页.
AlejandroChavez等.Highly-efficient
(72)发明人徐坤刘玉万张智英闫娜娜Cas9-mediatedtranscriptional
雒志新韩宝泉李欣憶张哓兰programming《.NatMethods》.2015,第12卷(第4
(74)专利代理机构西安通大专利代理有限责任期),第326–328页.
公司61200KimJH等.Highcleavageefficiencyof
代理人范巍a2Apeptidederivedfromporcine
(51)Int.Cl.teschovirus-1inhumancelllines,
C12N15/79(2006.01)zebrafishandmice《.PLoSOne》.2011,第6卷
C12N15/66(2006.01)(第4期),第1-8页.
(56)对比文件审查员储巧玲
CN106399368A,2017.02.15,权利要求书2页说明书20页
序列表4页附图10页
(54)发明名称
一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统
表达盒的建立
(57)摘要
本发明公开了增强基因表达的自激活Gal4/
UAS系统表达盒的建立，通过优化UAS数目及GAL4
激活/结合域类型，找到一种增强效果较好的表
达盒，由自身强启动子CMV启动，借助Gal4/UAS系
统使转录和翻译效率提高，从而产生自动激活、
级联放大的效果；在转染后第5-10天维持较高的
增强效果，第8天表达活性最高，说明表达盒增强
基因表达的稳定性；在专门生产重组蛋白的CHO
细胞中，增强效果大概是9倍。与现有基因表达盒
相比，结构简单、增强效果显著，为基因治疗的非
病毒转染途径和重组蛋白生产中增强目的基因
表达提供了一种途径和新方法。
CN107760707B
CN107760707B权利要求书1/2页

1.一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：该系统表达盒包括
真核启动子以及依次排列于真核启动子下游的目的基因插入位点、剪切肽序列和带有核定
位信号的GAL4蛋白序列，所述真核启动子的上游设置有拷贝数为0~6个的上游激活序列
UAS，所述表达盒由自身携带的启动子激活下游目的基因及GAL4结合蛋白和GAL4激活蛋白
的表达，GAL4结合蛋白会特异性的识别并结合上游激活序列，或者，在未能够结合上游激活
序列情况下，利用与结合蛋白偶联的GAL4激活蛋白招募转录相关因子，使得DNA弯曲，形成
一个可以和启动子特异结合的蛋白复合体，从而更快的起始基因转录；转录后翻译出来的
GAL4结合蛋白和激活蛋白，在剪切肽以及核定位信号协助下会再次的和上游激活序列特异
性结合，或者，在未能够结合上游激活序列情况下，进一步增强基因的转录和翻译。
2.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：
所述真核启动子选自CMV。
3.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：
所述剪切肽序列选自T2A、P2A、E2A或F2A序列。
4.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：
所述GAL4蛋白的DNA激活域选自VP64、p65、Rta、GAL4AD、VP64中的一种或多种相互串联的形
式，DNA结合域选自GAL4BD。
5.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：
所述上游激活序列UAS的拷贝数优选为4~6个。
6.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：
所述系统表达盒包括顺次排列的以下元件：拷贝数为4的上游激活序列UAS、真核启动子
CMV、目的基因插入位点、剪切肽序列、第