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(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号CN107760707B (45)授权公告日2020.05.19 (21)申请号201710381327.1CN106399368A,2017.02.15, (22)申请日2017.05.25CN101012282A,2007.08.08, CN106755050A,2017.05.31, (65)同一申请的已公布的文献号WO02101011A2,2002.12.19, 申请公布号CN107760707ACN106676132A,2017.05.17, (43)申请公布日2018.03.06CN103695375A,2014.04.02, (73)专利权人西北农林科技大学李春峰等.GAL4/PUAS系统在转基因技术中 地址712100陕西省西安市杨凌示范区邰的应用研究进展《.生物技术》.2006,第16卷(第1 城路3号期),第78-81页. AlejandroChavez等.Highly-efficient (72)发明人徐坤刘玉万张智英闫娜娜Cas9-mediatedtranscriptional 雒志新韩宝泉李欣憶张哓兰programming《.NatMethods》.2015,第12卷(第4 (74)专利代理机构西安通大专利代理有限责任期),第326–328页. 公司61200KimJH等.Highcleavageefficiencyof 代理人范巍a2Apeptidederivedfromporcine (51)Int.Cl.teschovirus-1inhumancelllines, C12N15/79(2006.01)zebrafishandmice《.PLoSOne》.2011,第6卷 C12N15/66(2006.01)(第4期),第1-8页. (56)对比文件审查员储巧玲 CN106399368A,2017.02.15,权利要求书2页说明书20页 序列表4页附图10页 (54)发明名称 一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统 表达盒的建立 (57)摘要 本发明公开了增强基因表达的自激活Gal4/ UAS系统表达盒的建立,通过优化UAS数目及GAL4 激活/结合域类型,找到一种增强效果较好的表 达盒,由自身强启动子CMV启动,借助Gal4/UAS系 统使转录和翻译效率提高,从而产生自动激活、 级联放大的效果;在转染后第5-10天维持较高的 增强效果,第8天表达活性最高,说明表达盒增强 基因表达的稳定性;在专门生产重组蛋白的CHO 细胞中,增强效果大概是9倍。与现有基因表达盒 相比,结构简单、增强效果显著,为基因治疗的非 病毒转染途径和重组蛋白生产中增强目的基因 表达提供了一种途径和新方法。 CN107760707B CN107760707B权利要求书1/2页 1.一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒,其特征在于:该系统表达盒包括 真核启动子以及依次排列于真核启动子下游的目的基因插入位点、剪切肽序列和带有核定 位信号的GAL4蛋白序列,所述真核启动子的上游设置有拷贝数为0~6个的上游激活序列 UAS,所述表达盒由自身携带的启动子激活下游目的基因及GAL4结合蛋白和GAL4激活蛋白 的表达,GAL4结合蛋白会特异性的识别并结合上游激活序列,或者,在未能够结合上游激活 序列情况下,利用与结合蛋白偶联的GAL4激活蛋白招募转录相关因子,使得DNA弯曲,形成 一个可以和启动子特异结合的蛋白复合体,从而更快的起始基因转录;转录后翻译出来的 GAL4结合蛋白和激活蛋白,在剪切肽以及核定位信号协助下会再次的和上游激活序列特异 性结合,或者,在未能够结合上游激活序列情况下,进一步增强基因的转录和翻译。 2.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒,其特征在于: 所述真核启动子选自CMV。 3.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒,其特征在于: 所述剪切肽序列选自T2A、P2A、E2A或F2A序列。 4.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒,其特征在于: 所述GAL4蛋白的DNA激活域选自VP64、p65、Rta、GAL4AD、VP64中的一种或多种相互串联的形 式,DNA结合域选自GAL4BD。 5.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒,其特征在于: 所述上游激活序列UAS的拷贝数优选为4~6个。 6.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒,其特征在于: 所述系统表达盒包括顺次排列的以下元件:拷贝数为4的上游激活序列UAS、真核启动子 CMV、目的基因插入位点、剪切肽序列、第
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