2019101805829基于GAL4-UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN109929865B
(45)授权公告日2022.03.08
(21)申请号201910180582.9C12N15/90(2006.01)
(22)申请日2019.03.11(56)对比文件
(65)同一申请的已公布的文献号CN109055375A,2018.12.21
申请公布号CN109929865ACN105658805A,2016.06.08
Dominguezetal..Beyondediting:
(43)申请公布日2019.06.25repurposingCRISPR–Cas9forprecision
(73)专利权人东南大学genomeregulationandinterrogation.
地址211102江苏省南京市江宁区东南大《naturereviews》.2015,第17卷第5-15页.
学路2号罗旻.CRISPR-dCas9系统在基因表达调控中
(72)发明人王进科徐新慧的最新研究进展《.实验室研究与探索》.2016,第
35卷(第3期),第20-23页.
(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所
(普通合伙)32204审查员郝永利
代理人孙斌

(51)Int.Cl.

C12N15/67(2006.01)权利要求书1页说明书13页
C12N15/113(2010.01)序列表7页附图5页
(54)发明名称
基于GAL4-UAS系统的CRISPR辅助反式增强
子激活基因表达的方法及其应用
(57)摘要
本发明公开了一种基于GAL4‑UAS系统的
CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法及
其应用，该激活基因表达的方法通过CRISPR‑
GAL4‑UAS系统将增强子DNA反式募集到靶基因
上，依靠反式增强子DNA本身以及反式增强子DNA
与CRISPR系统的互作，激活靶基因表达。本发明
通过对常规dCas9的改造发展了一种捕获dCas9
(cdCas9)；借助cdCas9/sgRNA复合物中cdCas9融
合GAL4与带UAS序列的巨细胞病毒(CMV)增强子
DNA的结合，将CMV增强子反式募集到靶基因上，
高效激活靶基因的表达；本发明的方法在生物医
学中具有广泛应用价值，可以应用在制备生物检
测及治疗试剂中。
CN109929865B
CN109929865B权利要求书1/1页

1.一种基于GAL4‑UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的方法，其特征在
于，通过融合GAL4的CRISPR系统将带有UAS序列的增强子DNA反式募集到靶基因上，依靠带
有UAS序列的反式增强子DNA本身以及带有UAS序列的反式增强子DNA与结合GAL4的CRISPR
系统的互作，激活靶基因表达；所述CRISPR系统指cdCas9与sgRNA形成的可与靶DNA序列结
合的复合物；所述cdCas9为常规dCas9或dCas9‑AD蛋白融合GAL4改造而成的一种捕获
dCas9；所述dCas9‑AD为经过基因融合改造过的融合各种激活域的dCas9蛋白；所述反式增
强子DNA是一段末端带有一段UAS序列的双链DNA，具有募集细胞内转录因子以激活基因表
达的功能；所述反式增强子DNA末端的UAS序列可与cdCas9的GAL4结合。
2.根据权利要求1所述的基于GAL4‑UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的
方法，其特征在于，所述GAL4为全长序列GAL4蛋白或GAL4的DNA结合结构域。
3.一种权利要求1所述的基于GAL4‑UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的
方法在制备生物检测及治疗试剂中的应用。

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CN109929865B说明书1/13页

基于GAL4‑UAS系统的CRISPR辅助反式增强子激活基因表达的
方法及其应用

技术领域
[0001]本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种基于GAL4‑UAS系统的CRISPR辅助
的反式增强子激活基因表达的方法及其应用。

背景技术
[0002]人工激活基因的表达在基础生物学研究和生物医学应用中具有重要作用。例如，
基因的功能往往是通过在基础研究中人工激活其在细胞或体内的表达来探索的。在生物医
学中，通常需要通过激活内源基因将细胞重编程为诱导干(iPS)细胞或其他分化细胞。在
医学上，癌症可以通过抑制各种激酶，激活增强免疫力，细胞凋亡和分化的相关基因来治
疗。因此，各种人工基因激活剂已经被开发。例如，激活域融合锌指(ZF)，转录激活物样效应
因子(TALE)和成簇规则间隔短回文重复序列(CRISPR)相关蛋白已经开发用于基因激活。在
这些蛋白质和复合物中，CRISPR相关(Cas)蛋白因其简单性而被广泛使用。
[0003]CRISPR