2022111336951一种血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其制备方法及多抗.pdf

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN115932254A
(43)申请公布日2023.04.07
(21)申请号202211133695.1
(22)申请日2022.09.15
(71)申请人聊城大学
地址252000山东省聊城市东昌府区湖南
路1号
(72)发明人司振书王凯莉刘成李玉保
路建彪裴兰英曹胜亮
(74)专利代理机构北京开阳星知识产权代理有
限公司11710
专利代理师董亚男
(51)Int.Cl.
G01N33/569(2006.01)
G01N33/543(2006.01)
G01N33/532(2006.01)
权利要求书2页说明书13页

序列表3页附图9页
(54)发明名称
一种血清4型禽腺病毒胶体金检测卡，其制
备方法及多抗
(57)摘要
本发明涉及检测制剂技术领域，尤其涉及一
种血清4型禽腺病毒胶体金检测卡，其制备方法
及多抗。本发明的胶体金试纸条实现在无特殊设
备的情况下对FAdV‑4进行快速诊断。本发明制备
得到的多抗效价大于1：256000，1：5000倍稀释时
具有良好的反应性；所制备的胶体金试纸条可检
2.0945
出FAdV‑4含量为10EID50的样本，对临床样
本的检测与PCR检测的符合率达97.87％，表明建
立的胶体金检测方法特异性强，灵敏度较高，可
用于家禽FAdV‑4感染的快速诊断。
CN115932254A
CN115932254A权利要求书1/2页

1.一种血清4型禽腺病毒胶体金检测卡，其特征在于，
所述胶体金试纸条包括从上到下依次固定于底板上的样品垫、胶体金结合垫、NC膜和
吸收垫，所述NC膜上设置有T线和C线；
所述胶体金结合垫上负载有胶体金标记的hexon‑L1多克隆抗体，所述hexon‑L1多克隆
抗体由含有血清4型禽腺病毒hexon‑L1基因片段的重组质粒表达得到的融合蛋白免疫动物
获得；
所述T线内包被有hexon‑L1多克隆抗体；所述C线内包被有羊抗兔IgG抗体。
2.根据权利要求1所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡，其特征在于，
所述胶体金结合垫负载所述胶体金标记的hexon‑L1多克隆抗体的负载量为0.01～0.5
μg；优选为0.1μg；
所述C线内包被所述羊抗兔IgG抗体的包被量为2～10μg，优选为5μg；
所述T线内包被hexon‑L1多克隆抗体的包被量为5～15μg，优选为7.5μg。
3.根据权利要求2所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡，其特征在于，
所述胶体金结合垫负载所述胶体金标记的hexon‑L1多克隆抗体的浓度为5～20μg/mL，
优选为10μg/mL，负载所述胶体金标记的hexon‑L1多克隆抗体的体积为10μL；
所述C线内包被所述羊抗兔IgG抗体的浓度为0.5～2mg/mL，优选为1mg/mL；包被所述羊
抗兔IgG抗体的体积为5μL；
所述T线内包被所述hexon‑L1多克隆抗体的浓度为1～3mg/mL，优选为1.5mg/mL；包被
所述hexon‑L1多克隆抗体的体积为5μL。
4.根据权利要求2或3所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡，其特征在于，所述胶体金
标记的hexon‑L1多克隆抗体的制备方法包括：
取30nm～50nm胶体金溶液，调整pH至7.8～8.2，加入hexon‑L1多克隆抗体，使hexon‑L1
多克隆抗体的终浓度为5～15μg/mL、优选为10μg/mL，混匀，封闭，经纯化后获得所述胶体金
标记的hexon‑L1多克隆抗体。
5.根据权利要求1所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡，其特征在于，所述hexon‑L1
多克隆抗体的制备方法为：
S1、扩增血清4型禽腺病毒hexon‑L1基因序列；
S2、将扩增得到的基因片段连接至载体质粒中，获得重组质粒；
S3、将所述重组质粒转化至载体细胞中，诱导表达，获得融合蛋白并进行纯化；
S4、将纯化后的融合蛋白免疫实验动物，获得所述hexon‑L1多克隆抗体。
6.根据权利要求5所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡，其特征在于，所扩增的
hexon‑L1基因片段的序列包括如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；
进行扩增采用引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2、SEQIDNO.3所示。
7.根据权利要求5所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡，其特征在于，在S3中，用
0.004～0.012mM、优选为0.008mMIPTG进行诱导表达，诱导的时间为3～5小时，优选为4小
时。
8.根据权利要求5所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡，其特征在于，S4包括：将纯化
的融合蛋白和弗氏完全佐剂1：1乳化，乳化完背部皮下多点注射清洁级新西兰大白兔1mg/
只；两周后进行二免，用弗氏不完全佐剂与融合蛋白1：1乳化，1mg/只；间隔两周后三免，融