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(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号CN115932254A (43)申请公布日2023.04.07 (21)申请号202211133695.1 (22)申请日2022.09.15 (71)申请人聊城大学 地址252000山东省聊城市东昌府区湖南 路1号 (72)发明人司振书王凯莉刘成李玉保 路建彪裴兰英曹胜亮 (74)专利代理机构北京开阳星知识产权代理有 限公司11710 专利代理师董亚男 (51)Int.Cl. G01N33/569(2006.01) G01N33/543(2006.01) G01N33/532(2006.01) 权利要求书2页说明书13页 序列表3页附图9页 (54)发明名称 一种血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其制 备方法及多抗 (57)摘要 本发明涉及检测制剂技术领域,尤其涉及一 种血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其制备方法 及多抗。本发明的胶体金试纸条实现在无特殊设 备的情况下对FAdV‑4进行快速诊断。本发明制备 得到的多抗效价大于1:256000,1:5000倍稀释时 具有良好的反应性;所制备的胶体金试纸条可检 2.0945 出FAdV‑4含量为10EID50的样本,对临床样 本的检测与PCR检测的符合率达97.87%,表明建 立的胶体金检测方法特异性强,灵敏度较高,可 用于家禽FAdV‑4感染的快速诊断。 CN115932254A CN115932254A权利要求书1/2页 1.一种血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其特征在于, 所述胶体金试纸条包括从上到下依次固定于底板上的样品垫、胶体金结合垫、NC膜和 吸收垫,所述NC膜上设置有T线和C线; 所述胶体金结合垫上负载有胶体金标记的hexon‑L1多克隆抗体,所述hexon‑L1多克隆 抗体由含有血清4型禽腺病毒hexon‑L1基因片段的重组质粒表达得到的融合蛋白免疫动物 获得; 所述T线内包被有hexon‑L1多克隆抗体;所述C线内包被有羊抗兔IgG抗体。 2.根据权利要求1所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其特征在于, 所述胶体金结合垫负载所述胶体金标记的hexon‑L1多克隆抗体的负载量为0.01~0.5 μg;优选为0.1μg; 所述C线内包被所述羊抗兔IgG抗体的包被量为2~10μg,优选为5μg; 所述T线内包被hexon‑L1多克隆抗体的包被量为5~15μg,优选为7.5μg。 3.根据权利要求2所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其特征在于, 所述胶体金结合垫负载所述胶体金标记的hexon‑L1多克隆抗体的浓度为5~20μg/mL, 优选为10μg/mL,负载所述胶体金标记的hexon‑L1多克隆抗体的体积为10μL; 所述C线内包被所述羊抗兔IgG抗体的浓度为0.5~2mg/mL,优选为1mg/mL;包被所述羊 抗兔IgG抗体的体积为5μL; 所述T线内包被所述hexon‑L1多克隆抗体的浓度为1~3mg/mL,优选为1.5mg/mL;包被 所述hexon‑L1多克隆抗体的体积为5μL。 4.根据权利要求2或3所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其特征在于,所述胶体金 标记的hexon‑L1多克隆抗体的制备方法包括: 取30nm~50nm胶体金溶液,调整pH至7.8~8.2,加入hexon‑L1多克隆抗体,使hexon‑L1 多克隆抗体的终浓度为5~15μg/mL、优选为10μg/mL,混匀,封闭,经纯化后获得所述胶体金 标记的hexon‑L1多克隆抗体。 5.根据权利要求1所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其特征在于,所述hexon‑L1 多克隆抗体的制备方法为: S1、扩增血清4型禽腺病毒hexon‑L1基因序列; S2、将扩增得到的基因片段连接至载体质粒中,获得重组质粒; S3、将所述重组质粒转化至载体细胞中,诱导表达,获得融合蛋白并进行纯化; S4、将纯化后的融合蛋白免疫实验动物,获得所述hexon‑L1多克隆抗体。 6.根据权利要求5所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其特征在于,所扩增的 hexon‑L1基因片段的序列包括如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列; 进行扩增采用引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2、SEQIDNO.3所示。 7.根据权利要求5所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其特征在于,在S3中,用 0.004~0.012mM、优选为0.008mMIPTG进行诱导表达,诱导的时间为3~5小时,优选为4小 时。 8.根据权利要求5所述的血清4型禽腺病毒胶体金检测卡,其特征在于,S4包括:将纯化 的融合蛋白和弗氏完全佐剂1:1乳化,乳化完背部皮下多点注射清洁级新西兰大白兔1mg/ 只;两周后进行二免,用弗氏不完全佐剂与融合蛋白1:1乳化,1mg/只;间隔两周后三免,融
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