202310634130X一种使用pH梯度进行阳离子层析的抗体纯化方法.pdf

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN116751304A
(43)申请公布日2023.09.15
(21)申请号202310634130.X

(22)申请日2023.05.31
(71)申请人鼎康（武汉）生物医药有限公司
地址430074湖北省武汉市武汉东湖新技
术开发区高新二路388号武汉光谷国
际生物医药企业加速器2.1期26、28、
29、30、33、34、35号楼（自贸区武汉片
区）
(72)发明人夏松高宏海倪天琪
(74)专利代理机构上海弼兴律师事务所31283
专利代理师黄益澍
(51)Int.Cl.
C07K16/46(2006.01)
C07K1/18(2006.01)
C07K1/22(2006.01)权利要求书1页说明书5页
序列表（电子公布）附图6页
(54)发明名称
一种使用pH梯度进行阳离子层析的抗体纯
化方法
(57)摘要
本发明公开了一种使用pH梯度进行阳离子
层析洗脱的方法，所述方法包括以下步骤：上样、
平衡、洗涤和洗脱；其中，所述洗脱使用缓冲液A
和缓冲液B的溶剂体系进行梯度洗脱，梯度洗脱
从0％‑100％缓冲液B，收集产品；所述的缓冲液A
为10～20mM柠檬酸，pH为4.5～5.5，所述的缓冲
液B为10～20mM十二水合磷酸氢二钠，pH为7.5～
8.5。本发明仅使用亲和层析和阳离子层析两步
纯化，将蛋白纯度提高到96％以上，节约纯化时
间，提高收率。
CN116751304A
CN116751304A权利要求书1/1页

1.一种使用pH梯度进行阳离子层析来纯化抗体的方法，其特征在于，所述方法包括以
下步骤：
上样、平衡、洗涤和洗脱；其中，所述洗脱使用包含缓冲液A和缓冲液B的溶剂体系，从
0％‑100％缓冲液B，进行梯度洗脱，收集产品；所述梯度洗脱优选进行18～35个柱体积；
所述的缓冲液A为10～20mM柠檬酸，pH为4.5～5.5，所述的缓冲液B为10～20mM十二水
合磷酸氢二钠，pH为7.5～8.5。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的缓冲液A为20mM柠檬酸，pH为5.0，所述
的缓冲液B为20mM十二水合磷酸氢二钠，pH为8.0。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法满足以下条件的一种或多种：
所述梯度洗脱为线性梯度洗脱；
所述梯度洗脱进行20个柱体积。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法使用的阳离子填料为CaptoS
impact。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述平衡使用20mM柠檬酸，pH为5.0，和/或，
所述平衡进行5～15个柱体积，优选所述平衡进行5个柱体积。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，
所述洗涤使用缓冲液A，和/或，
所述洗涤进行5～15个柱体积，优选所述洗涤进行5个柱体积。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述阳离子层析之前还包括亲和层析的步
骤；所述亲和层析包括上样、平衡、洗涤和洗脱，以获得应用于阳离子层析的抗体溶液。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述亲和层析后还包括对所述抗体溶液进行
离心换液；优选地，所述离心换液使用的缓冲液的pH为5.0，电导小于4ms/cm；
更优选地，所述缓冲液为10mM组氨酸，10mM天冬氨酸。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法满足以下条件的一种或多种：
所述抗体溶液为双特异性抗体的溶液；
所述亲和层析使用的填料为MabSelectTMPrismA；
所述亲和层析的平衡使用10～30mMPB，120～180mMNaCl，pH6.5～7.5，进行5～15个
柱体积；
所述亲和层析的洗涤使用0.1～1M醋酸钠，0.2～0.8MNaCl，pH4.5～5.5，进行5～15
个柱体积；
所述亲和层析的洗脱使用0.1～1M醋酸钠，pH3.0～4.2，进行3～12个柱体积。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法满足以下条件的一种或多种：
所述亲和层析的上样量为67mg，
所述亲和层析的平衡使用20mMPB，150NaCl，pH7.0，进行5个柱体积，
所述亲和层析的洗涤使用0.1M醋酸钠，0.5MNaCl，pH5.0，进行5个柱体积，
所述亲和层析的洗脱使用0.1M醋酸钠，pH3.6，进行6个柱体积。

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CN116751304A说明书1/5页

一种使用pH梯度进行阳离子层析的抗体纯化方法

技术领域
[0001]本发明属于生物制药，特别是涉及一种使用pH梯度进行阳离子层析洗脱的抗体纯
化方法，具体而言是通过使用pH梯度来进行蛋白质单体与聚体的分离，达到去除聚体的目
的。

背景技术
[0002]在抗体药物研发过程中，蛋白质聚集是一种可能发生与生产过程各步骤的现象，
包括发酵和纯化