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(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN110628924A
(43)申请公布日2019.12.31
(21)申请号201910959712.9C12N15/11(2006.01)

(22)申请日2019.10.10

(71)申请人中国检验检疫科学研究院
地址100000北京市大兴区亦庄经济技术
开发区荣华南路11号
(72)发明人王静刘威慈颖林楠张乔
张晓龙孙筱霞杨燕
(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理
事务所(特殊普通合伙)
11465
代理人崔自京
(51)Int.Cl.
C12Q1/689(2018.01)
C12Q1/6844(2018.01)
C12Q1/04(2006.01)权利要求书1页说明书6页
序列表1页附图2页
(54)发明名称
一种用于检测布鲁氏菌的引物组合、试剂盒
和PSR方法
(57)摘要
本发明公开了一种用于检测布鲁氏菌的引
物组合、试剂盒和PSR方法,属于生物检测技术领
域。本发明用引物组合对待测样品进行PSR反应,
检测PSR反应产物,确定待测样品是否含有布鲁
氏菌。本发明的PSR方法操作简便,反应时间短,
灵敏度高,特异性强。
CN110628924A
CN110628924A权利要求书1/1页

1.一种用于检测布鲁氏菌的引物组合,其特征在于,具体引物序列如下:
FP:5’-AGGCGCAAATCTTCCACCTTGCGCCTATTGGGCCTATAACGG-3’;SEQIDNO.1;
BP:5’-AGGCGCAAATCTTCCACCTTGAAATTCAGGTCTGCGACCGAT-3’;SEQIDNO.2;
IB:5’-CGTAAGGATGCAAACATCAA-3’;SEQIDNO.3;
IF:5’-CCTTGCCATCATAAAGGCC-3’;SEQIDNO.4。
2.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括裂解液、2×PSR反应
缓冲液、双指示系统和阳性对照。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述裂解液为含5%Chelex-100,1%
TritonX-100的TE缓冲液。
5.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述2×PSR反应缓冲液含有下列组分:

pH8.8Tris-HCl,20mmol;KCl,50mmol;MgSO4,8mmol;(NH4)2SO4,10mmol;Tween20,0.1%;
Betaine,0.8mol。
6.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述双指示系统包括显色液和/或荧光
染料;所述显色液包括0.08mM甲酚红和0.02mM苯酚红;所述荧光染料为1×水溶液的
EveGreen。
7.一种用于检测布鲁氏菌的PSR方法,其特征在于,包括如下步骤:用权利要求1所述的
引物组合对待测样品进行PSR反应,检测PSR反应产物,确定待测样品是否为布鲁氏菌。
8.根据权利要求7所述的一种用于检测布鲁氏菌的PSR方法,其特征在于,所述PSR反应
体系如下:3.6μL模板DNA,12.5μL2×PSR反应缓冲液,2.4μL引物混合液,3.5μLdNTPs,1.0
μLBstDNA聚合酶,1.0μL显色液/荧光染料,以双蒸水补至25μL;
所述引物混合液包括50μmol/L的FP和BP各0.8μL,50μmol/L的IB和IF各0.4μL;
所述dNTPs的终浓度为1.4mmol/L/种;
所述BstDNA聚合酶的终浓度为8U。
9.根据权利要求7所述的一种用于检测布鲁氏菌的PSR方法,其特征在于,所述PSR反应
的反应条件为65℃,40min。
10.根据权利要求7所述的一种用于检测布鲁氏菌的PSR方法,其特征在于,所述检测
PSR反应产物通过双指示系统确定待测样品是否为布鲁氏菌的方法如下:
(1)显色法,扩增反应后,若待检样品反应管液体呈黄色,表示检出布鲁氏菌核酸,该样
品检测结果为初筛阳性;若待检样品反应管液体呈粉红色,表示未检出布鲁氏菌核酸,检测
结果为阴性;
或(2)荧光法,在荧光定量仪中进行扩增反应:阳性反应的表现为,在反应阶段出现S型
扩增曲线,且溶解曲线为单一峰;阴性反应的表现为,在反应阶段无扩增曲线,且溶解曲线
无峰出现;结果判定标准:在阳性对照发生阳性反应且阴性对照发生阴性反应的前提下,待
检样品在反应阶段出现S型扩增曲线,且溶解曲线为单一峰,并与阳性对照单一峰位置接
近,此时待检样品判断为阳性,否则为阴性;如果阳性待检样品发生了阴性反应,或者阴性
待检样品发生了阳性反应,应重新检测。


2
CN110628924A说明书1/6页

一种用于检测布鲁氏菌的引物组合、试剂盒和PSR方法

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